成像腹侧海马轴突在突触共培养中尼古丁诱导的钙信号传导

取小鼠腹侧海马切片与伏隔核神经元在盖玻片上的遗传修饰共培养物。

海马神经元投射出过表达烟碱型乙酰胆碱受体的突触前轴突末梢，与突触后伏隔核神经元形成突触。

神经元加载了钙离子指示剂染料，用于细胞内钙离子浓度的测定。

将盖玻片转移至含有钙离子的缓冲液灌流的共聚焦显微镜样品室中。

以海马轴突投射的荧光图像作为对照进行采集。

灌注尼古丁，其与海马神经元上的烟碱型乙酰胆碱受体结合，引发钙离子内流。

钙离子与细胞内染料结合，增强荧光。

海马轴突释放兴奋性神经递质，启动伏隔核神经元中的突触传递。

用缓冲液洗涤以去除尼古丁。

随着时间推移，烟碱型乙酰胆碱受体的激活会引起细胞内储存钙的释放，导致染料荧光增强，表明腹侧海马轴突中持续的钙信号传导。

将培养物逐个转移至成像室。采集腹侧海马微切片中轴突投射的荧光探针荧光图像，作为尼古丁处理前的基线对照。

接下来，以每分钟2毫升的速度快速灌注1微摩尔的尼古丁，持续1分钟，然后用HBS混合液洗去尼古丁。在尼古丁处理前、处理期间及处理后，每隔10秒采集一次延时图像，持续30分钟。