大鼠脑切片中突触事件的光遗传学刺激和电生理记录

0 次观看3:18 分钟 • July 8th, 2025

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从大

鼠脑切片开始,其中包含与来自不同大脑区域的光敏轴突相连的靶神经元区域。

切片放入浸没式记录室中,并用切片锚固定。

在显微镜下,找到所需的层并识别目标锥体神经元。

抬起显微镜物镜,以形成具有切片表面的弯月面。

将装有细胞内记录溶液的玻璃微量移液器放入该弯月面中。

用移液器吸头接触已识别的锥体细胞,在膜上形成凹痕。

施加吸力以形成密封。

增加吸力,直到膜破裂,建立全细胞配置。

使用安装的光源,将光脉冲施加到切片上。

这些光脉冲触发光敏轴突中的动作电位,在突触间隙释放神经递质。

记录锥体神经元对这些释放的反应以分析突触效率。

为了识别目标细胞,将切片放入记录室中,并使用切片锚将其固定。在低放大倍率下,使用红外照明,导航到 LEC 第 5 层。然后,切换到高倍水浸物镜,识别锥体神经元。

用胶带在显示器上标记单元格的位置。接下来,为了形成全细胞膜片钳,制造硼硅酸盐玻璃微量移液器,并用细胞内记录溶液填充。将装满的微量移液器放入电极支架中,并通过向连接到电极支架侧端口的吹嘴用力吹气来施加正压。

抬起显微镜物镜,形成弯月面,并将电极插入弯月面,直到在显微镜上可以看到。打开密封测试窗口,确定移液器电阻是否为三到五兆欧。然后,用移液器吸头触摸已识别的细胞,导致细胞膜上出现压痕。

接下来,通过吸嘴施加负压,增加移液器的阻力。继续逐渐施加负压,直到细胞膜破裂,导致全细胞电容瞬变。要进入电流钳位配置,请使用带有滤光片立方体和适当光学器件的安装 LED 引导到显微镜光路中,并通过 40 倍物镜光脉冲施加到切片上。以 5 赫兹、10 赫兹和 20 赫兹传递多个光脉冲序列,以研究突触前释放特性。

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最后更新:1 八月 2026