直流电刺激对小鼠脑片诱发癫痫发作的影响

取一个包含丘脑内侧核（MT）的小鼠脑切片，该区域投射至前扣带皮层（ACC）。

将切片固定在充满含氧人工脑脊液（aCSF）的多电极阵列记录 chamber 中，以记录电信号。

放置阳极和阴极，并施加直流电刺激（DCS），从而在脑片上产生电场。

关闭 DCS，并将电极置于 MT。给予刺激以诱发丘脑神经元的动作电位，从而触发神经递质释放。

神经递质触发前扣带皮层神经元的离子内流，并产生电学信号，称为刺激诱发的突触反应。

重新激活 DCS 以监测其对 ACC 突触反应的影响。

接下来，关闭 DCS 并引入致痫药物。

这些药物会提高神经元兴奋性，导致丘脑刺激在前扣带皮层（ACC）中持续引发信号簇，称为诱发性癫痫发作。

最后，重新激活 DCS，通过测量癫痫发作幅度和持续时间的减少来评估其对癫痫发作的影响。

在此步骤中，通过置于MEA腔室内的两根平行的氯化银涂层银丝之间通入电流，确保产生均匀的电场。若无任何问题，直流电刺激（DCS）应保持在0.5至2毫安之间。

接下来，关闭直流电刺激（DCS），并使用钨电极刺激丘脑。为获得前扣带皮层（ACC）中的最大突触反应，记录10至20个反应并进行平均。然后，开启DCS，同时刺激丘脑。评估DCS期间丘脑刺激诱发的ACC反应的幅度变化。

现在，关闭直流电刺激（DCS）。向灌流液中加入250 µM 4-AP和5 µM 荷包牡丹碱（bicuculline），孵育两到三小时。如果药物对脑片产生作用，脑片应出现皮层癫痫样反应。随后，记录10至20次前扣带皮层反应，并测量电刺激诱发的皮层癫痫样反应的幅度和持续时间。

接下来，开启直流电刺激（DCS）并同时刺激丘脑。在施加 DCS 期间，评估诱发电皮层癫痫样反应的幅度和持续时间的变化。随后，更换灌流液为新鲜的 aCSF，以洗脱药物。