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首先在细胞外基质包被的多电极阵列 (MEA) 上对早期胚胎雏鸡神经元进行贴壁培养。
MEA 的底部包含记录神经元活动的微小电极网格。
在测试培养物中,神经元在毒素存在的情况下生长,而在对照培养物中,神经元在没有毒素的情况下生长。
在记录之前,用无毒培养基替换两个MEA中的培养基并短暂孵育。
接下来,将一个 MEA 放入录音设备中并开始录音。
神经元通过称为动作电位或尖峰的电脉冲进行交流。
在突触处,这些动作电位触发神经递质释放,将信号传播到下一个神经元。
MEA 电极记录突触连接的神经元产生的尖峰。
在对照条件下,健康的成熟神经元网络表现出同步的尖峰活动。
在测试培养物中,减少的尖峰和同步性表明毒素导致的神经元网络成熟受损。
在采集当天,用新鲜的神经基础培养基替换培养基,并将阵列返回 CO2 培养箱至少两个小时,然后再记录。启动录制软件,单击温度图标将多电极阵列的温度设置为 37 摄氏度。通过在左侧窗口面板中选择流,然后右键单击缪斯图标来设置采集参数。然后,选择添加处理和尖峰检测器,并在弹出窗口中单击确定。STD 的 Spike Detector 6 将出现在文件名下方。
接下来,右键单击尖峰检测器,选择添加处理和突发检测器,然后在弹出窗口中单击确定。Burst Detector ISI 将出现在缪斯图标下方。然后右键单击 Burst Detector,选择 Add Processing and Neural Statistics Compiler。在弹出窗口中,确保选择了文件头、聚合井统计和同步。单击确定。
统计编译器将显示在下方。单击屏幕底部的时钟图标,然后将"设置"部分中的信息更改为每 5.1 分钟录制一次,并录制 5 分钟。这将立即启动并执行一次。从培养箱中取出多电极阵列后,将其放在记录单元上并将其锁定到位。通过单击计划录制部分中的开始录制开始录制网络活动。
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