神经元细胞中蛋白质的提取

取一个含有贴壁神经元癌细胞的细胞培养物，并将其保持在低温条件下。

吸去培养基，并用冷磷酸盐缓冲液反复洗涤细胞，以去除残留的培养基。

加入含有低浓度非离子型去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。

非离子型去污剂通过破坏细胞膜来启动裂解过程。

同时，蛋白酶抑制剂可阻断细胞内的蛋白水解酶，从而保护蛋白质免受酶降解。

接着，使用细胞刮刀将部分裂解的细胞从盖玻片上刮下。

将内容转移至含有裂解缓冲液的离心管中。

在低温条件下，使用匀浆器机械裂解细胞，确保细胞完全裂解并释放蛋白质。

离心细胞裂解液。

将上清液收集到新的离心管中。

神经肿瘤细胞中提取的蛋白质现已准备好进行进一步分析。

为验证蛋白质表达，在转染后48小时，将培养皿置于冰上，用PBS洗涤细胞两次。每皿中加入200至400微升裂解缓冲液处理细胞，并用细胞刮棒将细胞从盖玻片上刮下。

将每个培养皿中脱落的细胞转移至单独的微量离心管中，并在冰上使用匀浆器进一步解离细胞。一分钟后，通过离心沉淀匀浆后的细胞碎片。