从神经元细胞中提取蛋白质

0 次观看1:58 分钟 • July 8th, 2025

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取含有附着在盖玻片上的神经元癌细胞的细胞培养物,并将其保存在寒冷的条件下。

取出培养基,用冷磷酸盐缓冲液反复洗涤细胞以消除残留培养基。

加入含有低浓度非离子去垢剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。

非离子洗涤剂破坏细胞膜以启动裂解。

同时,蛋白酶抑制剂阻断细胞蛋白水解酶,保护蛋白质免受酶促降解。

接下来,使用细胞刮刀将部分裂解的细胞从盖玻片上移开。

将内容物转移到装有裂解缓冲液的试管中。

寒冷条件下,使用均质器对细胞进行机械裂解,确保细胞完全裂解和蛋白质释放。

心细胞裂解物。

上清液收集到新鲜的管中。

从神经元肿瘤细胞中提取的蛋白质现在可以进行进一步分析。

为了验证蛋白质表达,转染后 48 小时,将培养皿放在冰上并用 PBS 洗涤细胞两次。用 200 至 400 微升裂解缓冲液处理每个培养皿中的细胞,并使用细胞刮刀从盖玻片上去除细胞。

将分离

的细胞从每个板转移到单独的微量离心管中,并在冰下用均质器进一步解离细胞。一分钟后,通过离心沉淀均质细胞片段。

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最后更新:1 八月 2026