Modeling Neuronal Injury in Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons

doi:10.3791/31304

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Encyclopedia of Experiments Neuroscience

Modeling Neuronal Injury in Mouse Primary Cerebellar Granule Neurons

小鼠原代小脑颗粒神经元神经元损伤建模

Protocol

376 Views

01:59 min

July 8, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

从小鼠原代小脑颗粒神经元的培养物开始。

添加高浓度的 N-甲基-D-天冬氨酸或 NMDA（一种兴奋性神经递质受体激动剂）和甘氨酸（一种协激动剂）。孵化培养物。

NMDA 和甘氨酸与 NMDA 受体上各自的位点结合，导致过度刺激并导致钙离子大量流入。

细胞内钙的增加会激活钙依赖性磷脂酶，从而降解细胞膜磷脂，导致膜损伤。

此外，细胞内钙会激活降解细胞蛋白质的蛋白酶。

钙水平升高还会诱导线粒体应激和碎片化，导致活性氧（ROS）的释放，并引起氧化应激。

此外，细胞内钙会激活 DNase，DNA 酶与 ROS 一起导致 DNA 损伤，最终导致神经元死亡。

用

不含 NMDA 和甘氨酸的新鲜培养基替换培养基，以停止信号级联。

NMDA 诱导的神经元损伤模型已准备好进行进一步分析。

为了用NMDA诱导神经元兴奋性毒性，在体外7天后，用100微摩尔NMDA和10微摩尔甘氨酸处理小脑颗粒神经元一小时。然后，用来自平行培养物的条件培养基替换培养基，无需处理。该浓度导致治疗后 24 小时 50% 的细胞死亡。