建立小鼠原代小脑颗粒神经元损伤模型

从培养小鼠原代小脑颗粒神经元开始。

加入高浓度的N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA），即一种兴奋性神经递质受体激动剂，以及甘氨酸（一种共激动剂）。孵育培养物。

NMDA 和甘氨酸分别结合到 NMDA 受体上的特定位点，导致受体过度激活，引起大量钙离子内流。

细胞内钙离子浓度升高会激活钙依赖性磷脂酶，后者降解细胞膜磷脂，导致膜损伤。

此外，细胞内钙离子可激活降解细胞蛋白的蛋白酶。

升高的钙水平还会引发线粒体应激和断裂，导致活性氧（ROS）释放，从而引起氧化应激。

此外，细胞内钙离子激活脱氧核糖核酸酶（DNases），后者与活性氧共同作用，导致DNA损伤，最终引发神经元死亡。

更换为不含NMDA和甘氨酸的新鲜培养基，以终止信号级联反应。

NMDA诱导的神经元损伤模型已准备就绪，可供进一步分析。

为了通过NMDA诱导神经元兴奋性毒性，经过七天后 在 体外 用100微摩尔NMDA和10微摩尔甘氨酸处理小脑颗粒神经元1小时。随后，将培养基更换为未经处理的平行培养物的条件培养基。该浓度处理在给药后24小时导致50%的细胞死亡。