从运动神经元裂解液中免疫沉淀目标蛋白质-DNA复合物

从含有经预处理的磁珠的离心管开始，该磁珠表面包被有特异性抗体，该抗体与目标蛋白交联至DNA。

加入含有DNA片段的运动神经元裂解液，并在振荡条件下孵育。

DNA片段与抗体包被的磁珠结合，形成磁珠-DNA复合物。

离心以收集管盖中的液体，并将其置于磁力架上，使珠-DNA复合物沉淀。

移除含有未结合DNA片段的上清液。

加入基于去污剂的裂解缓冲液，以溶解非特异性结合的DNA片段。

离心并进行磁性分离，然后移除上清液。

用高盐缓冲液洗涤，以破坏非特异性相互作用。离心，进行磁分离，并移除上清液。

用 LiCl 缓冲液洗涤以去除残留的非特异性相互作用。离心，进行磁分离，并移除上清液。

最后，用 Tris-HCl 缓冲液洗涤，离心，并进行磁分离。

弃去上清液，收集含有目标蛋白-DNA 复合物的磁珠。

开始染色质免疫沉淀时，用1毫升封闭液洗涤包被抗体的磁珠。将含有包被抗体磁珠的离心管置于4摄氏度的摇床上孵育5分钟。短暂离心后，将离心管置于磁力架上，吸除上清液。

将抗体包被的磁珠重悬于50微升封闭液中。向抗体包被的磁珠中加入1毫升超声处理的裂解物。然后，在4摄氏度下于摇床上孵育过夜。样品孵育过夜后，通过短暂离心收集管盖上的液体。随后将离心管置于磁力架上，1分钟后用移液器小心吸去上清液。

接下来，按如下步骤进行一系列洗涤操作。向样品中加入1毫升含有CPI的预冷洗涤缓冲液。在4摄氏度下，将样品置于摇动平台上混匀5分钟。短暂离心样品管。然后将样品管置于磁力架上。1分钟后，用移液器吸除上清液。