建立寨卡病毒感染脑类器官的体外模型

取一个含有人脑类器官的多孔板，其中培养基为神经诱导培养基。

类器官包含干细胞、放射状胶质细胞、神经前体细胞（NPCs）以及以玫瑰花结样放射状排列的神经元，模拟了发育中的大脑结构。

移除培养基，并用缓冲液清洗类器官。

将含有寨卡病毒的缓冲液加入检测孔，对照孔中仅加入缓冲液。

孵育，使病毒与其在神经前体细胞（NPCs）上的受体结合并被内化。

洗涤以去除未内化的病毒，然后加入新鲜的神经诱导培养基并继续培养。

被内化的病毒利用宿主细胞的机制形成新的病毒颗粒。

病毒增殖会引发细胞应激反应，从而诱导细胞凋亡，减少可用于类器官发育的神经前体细胞数量。

随着时间推移，受感染的类器官表现出体积减小和形态结构紊乱，类似于寨卡病毒感染人类后出现的异常脑发育。

将 Earle's 1X 平衡盐溶液、1X PBS 和神经诱导培养基在水浴中加热至 37 摄氏度。接着，用已知浓度的寨卡病毒以 1X Earle's 溶液稀释至目标感染复数，通常为 0.1 至 10 之间。使用 P200 移液器小心吸除每个类器官孔中的全部培养基，然后迅速用 200 微升预热的 1X PBS 清洗类器官。

从每个孔中移除培养基时，关键是要避免触碰类器官或将类器官吸入移液枪头中。这可能会对类器官造成不可逆的损伤。如果发生这种情况，最好丢弃该类器官。

接下来，使用单通道P200移液器小心地从每个类器官孔中移除所有残留液体。然后，迅速向每孔加入50 µL的1×Earle's溶液（模拟感染）或寨卡病毒溶液。确保每个类器官完全浸没。操作完成后，将培养板放回37°C培养箱中孵育2小时。

病毒暴露完成后，用 200 微升 PBS 清洗类器官的每个孔。静置 15 秒使类器官沉降，然后使用单通道 P200 移液器吸除 PBS。最后，向每个孔中加入 200 微升新鲜神经诱导培养基，并将培养板放回培养箱中。