通过脂多糖注射在斑马鱼幼鱼中诱导神经炎症

将麻醉后的斑马鱼幼鱼置于铺有琼脂糖凝胶的培养皿中，并确保其脑部朝上，以便注射。

将培养皿置于显微镜下，以观察脑室，脑室是发育中脑内的充满液体的腔隙。

取一支含有脂多糖（LPS）溶液的显微注射针，脂多糖是一种可触发免疫反应的细菌成分。

将针头置于大脑顶盖上方，该区域含有神经元和常驻免疫细胞，特别是小胶质细胞。

用针头刺穿大脑，将LPS溶液注入脑室。

周围组织中的小胶质细胞通过Toll样受体与LPS结合。

这种结合会触发促炎性细胞因子的释放，从而募集中性粒细胞至该部位，导致神经炎症。

中性粒细胞产生大量活性氧，并释放蛋白水解酶，导致神经元死亡。

将诱导神经炎症的幼虫转移至培养基中，以维持其活性用于后续检测。

将显微操作仪调节至微注射装置的针尖与高倍镜下幼虫处于同一视野。使用微波炉加热熔化2%琼脂糖的双蒸水溶液。将熔化的琼脂糖倒入塑料培养皿中。用塑料移液管将麻醉后的幼虫转移至涂有2%琼脂糖的塑料培养皿中央。

将固定好的幼鱼调整为脑侧朝上，以便进行针头操作。调节显微镜放大倍数，使斑马鱼脑室结构在视野中清晰可见。将针头小心地置于中脑顶盖上方。用70%乙醇清洁脑部区域，然后使用显微操作器缓慢地用针尖刺破斑马鱼脑部的皮肤。

踩下脚踏板，注入一纳升的1倍浓度PBS或不同浓度的脂多糖。注射后立即将幼虫转移至干净的E3培养基中。