Modeling Reactive Oxygen Species-Induced Neuronal Death in Mouse Cerebellar Granule Neurons

doi:10.3791/31316

Encyclopedia of Experiments
Neuroscience

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Encyclopedia of Experiments Neuroscience

Modeling Reactive Oxygen Species-Induced Neuronal Death in Mouse Cerebellar Granule Neurons

小鼠小脑颗粒神经元活性氧诱导的神经元死亡建模

Protocol

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01:59 min

July 8, 2025

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Transcript

取小鼠原代小脑颗粒神经元的培养物。

加入含有过氧化氢、活性氧或ROS的培养基，并短暂孵育。

过氧化氢扩散到细胞中并转化为高反应性自由基。

这些自由基诱导脂质过氧化，损害细胞膜的完整性。

此外，自由基会引起细胞蛋白质的氧化修饰，从而损害其功能。

此外，它们还会诱导 DNA 断裂，导致基因组不稳定。

自由基还会对细胞内细胞器（包括线粒体）造成氧化损伤。

作为响应，受损的线粒体释放细胞色素 c，与细胞凋亡蛋白酶激活因子-1 结合，触发凋亡体形成以及半胱天冬酶前 9 转化为活性半胱天冬酶-9。

半胱天冬酶 9 激活刽子手半胱天冬酶，进一步切割细胞蛋白并导致细胞凋亡性神经元死亡。

用

新鲜的、不含过氧化氢的培养基替换培养基，以停止信号级联。

对于ROS诱导的细胞死亡，用75至100微摩尔的过氧化氢处理神经元5分钟。五分钟后，将其从平行培养物切换到条件培养基。

由于过氧化氢的不稳定性，必须将浓度优化到24小时后诱导50%至70%细胞死亡的水平。该浓度通常在 75 至 100 微摩尔之间。