模拟活性氧诱导的小鼠小脑颗粒神经元死亡

取一培养物的小鼠原代小脑颗粒神经元。

加入含有过氧化氢（一种活性氧或ROS）的培养基，短暂孵育。

过氧化氢扩散进入细胞，并转化为高活性的自由基。

这些自由基引发脂质过氧化，破坏细胞膜的完整性。

此外，自由基会引起细胞蛋白质的氧化修饰，从而损害其功能。

此外，它们会诱导DNA断裂，导致基因组不稳定。

这些自由基还会对细胞内细胞器（包括线粒体）造成氧化损伤。

作为响应，受损的线粒体会释放细胞色素c，后者与凋亡蛋白酶激活因子-1结合，触发凋亡体的形成，并促使前体半胱天冬酶-9转化为有活性的半胱天冬酶-9。

Caspase 9 激活效应 caspase，进一步切割细胞蛋白，导致神经元的凋亡性死亡。

更换为新鲜的、不含过氧化氢的培养基，以终止信号级联反应。

对于活性氧诱导的细胞死亡，用75至100微摩尔的过氧化氢处理神经元5分钟。5分钟后，更换为平行培养物的条件培养基。

由于过氧化氢不稳定，其浓度必须优化至在24小时后可诱导50%至70%细胞死亡的水平。该浓度通常介于75至100微摩尔之间。