机械损伤 果蝇 幼虫节段神经以诱导神经退行性变

取三龄Drosophila幼虫，用二氧化碳麻醉。

在显微镜下，将幼虫腹面朝上放置，以观察其体节神经。

这些神经包含运动神经元，可支配体壁肌肉并控制幼虫运动。

这些神经元的轴突末梢与肌纤维相连，形成神经肌肉接头或NMJs。

神经元释放神经递质，这些递质与肌纤维上的受体结合，引起离子内流并触发信号传导。

使用镊子夹住腹侧角质层，以损伤节段神经，从而抑制运动。

将受伤的幼虫放置在含有幼虫食物的琼脂平板上，以确保其存活。

将培养皿放入培养皿中，用湿润的纸巾覆盖以保持湿度，并将其置于容器中，以促进幼虫恢复。

随着时间推移，损伤会导致运动神经元死亡，即神经退行性变，从而破坏神经肌肉接头（NMJs）。

将每只幼虫放置在 CO₂ 麻醉装置上。在解剖显微镜下，小心地将每只幼虫翻转至背侧，以透过体壁观察各体节神经。

在损伤前，必须小心地将每条幼虫翻转至背侧，以便通过体壁观察其节段神经。

从口钩开始，将5号镊子置于幼虫体长约二分之一至三分之二的位置。定位后，用5号镊子夹住腹侧体壁约三分之一的区域，该区域包含节段神经。为确保幼虫节段神经受损，需施加足够压力以压碎节段神经，同时保持体壁完整。为确定合适的施力程度，可先压碎10只幼虫，并确保5小时后的死亡率低于50%。

损伤后，小心将幼虫转移至含有约0.5克酵母糊的果汁琼脂平板上。将每只幼虫的前端置于酵母糊上，以维持其持续进食。将含酵母糊和10只受损幼虫的琼脂平板放置于一个空的100 mm × 15 mm培养皿底部。用湿润的纸巾覆盖培养皿，注意确保纸巾不接触幼虫或琼脂平板。随后，将培养皿置于室温下的密闭容器中。最后，在损伤后指定的时间点取出幼虫进行解剖。