在 EAE 小鼠模型中使用荧光染料确定血脑屏障破坏

从含有与大葡聚糖链结合的绿色荧光染料的溶液开始。然后，加入与小葡聚糖链结合的红色染料溶液。

染料彻底混合并放入注射器中。

后窦（眼睛后面的静脉）将这种染料混合物静脉注射到麻醉的小鼠体内。

这只小鼠患有实验性自身免疫性脑脊髓炎或EAE。

在这种情况下，血脑屏障受到干扰，大脑血管内皮细胞之间的紧密连接减弱，并带有间隙。

让小鼠完全苏醒并恢复运动，使染料能够循环。

带有小葡聚糖链的红色染料很容易通过小间隙扩散到脑组织中，而与大葡聚糖链结合的绿色染料在损伤严重时会扩散。

脑组织中每种荧光染料的量与血脑屏障破坏的程度相关。

为了制备葡聚糖储备溶液，将 10 毫克 3 千道尔顿葡聚糖德克萨斯红溶解在 500 微升 0.9% 氯化钠溶液中，将 5 毫克 10 千道尔顿葡聚糖 AlexaFluor 488 溶解在 250 微升 0.9% 氯化钠溶液中。

对于葡聚糖工作溶液，在注射前，将 55 微升 10 千道尔顿葡聚糖 AlexaFluor 488 储备溶液移液到一块密封膜上，然后加入 55 微升 3 千道尔顿葡聚糖德克萨斯红储备溶液。将 100 微升混合并收集到一次性细注射器中。

接下来，将麻醉的小鼠放在桌子上的侧向位置。在小鼠醒来之前，将100微升荧光示踪剂静脉注射到小鼠体内。让示踪剂循环 15 分钟。