小鼠颅面组织的免疫染色

取包含神经嵴细胞的固定小鼠胚胎颅面组织的冷冻切片。

用含有非离子型去污剂的缓冲液冲洗切片，以去除包埋介质并通透细胞膜，从而使检测能够进入细胞内靶标。

加入封闭液以饱和非特异性结合位点。

去除多余的封闭液。随后，加入针对核抗原的一抗进行孵育，例如转录因子和增殖标志物。

用缓冲液洗涤以去除未结合的抗体。

孵育荧光染料标记的二抗，使其与结合抗原的一抗结合。

使用缓冲液去除未结合的抗体。

加入含荧光核染料的抗荧光淬灭剂，并用盖玻片封片。

染料对细胞核进行染色，而抗淬灭封片介质在成像过程中保护荧光信号。

在荧光显微镜下对切片进行成像，以评估核标记物的表达与定位，从而指示神经嵴细胞的增殖与信号转导活性。

用0.1% PBST冲洗载玻片，每次5分钟，共冲洗三次，以洗去OCT并透化组织切片。每张载玻片加入200微升封闭液，在室温下孵育30分钟。随后，不冲洗载玻片，直接移除封闭液。每张载玻片加入100微升用封闭液稀释的一抗，于4摄氏度孵育过夜。

在室温下用 PBS 每次冲洗载玻片 10 分钟，共冲洗三次。加入 100 微升用封闭液稀释的二抗，于室温避光孵育 1 小时。在室温下继续避光，用 PBS 每次冲洗 10 分钟，共冲洗三次。封片时，在每张载玻片上滴加两滴含 DAPI 的抗荧光淬灭封片剂，盖上盖玻片，于 4 摄氏度保存，直至准备成像。