0 次观看 • 3:22 分钟 • July 8th, 2025
取健康和脑损伤的斑马鱼幼鱼的树脂包埋、化学固定的超薄脑切片，切片置于单孔载网上。
使用重金属对切片进行染色，以在显微成像过程中增强图像对比度。
将载网放入样品 holder 中，并将 holder 转移至显微镜观察室。
将网格对准电子枪下方，电子枪用于产生电子束。
一系列电磁透镜和线圈将电子束聚焦到样品切片上。
移动样品架，以光栅模式扫描切片。
当电子束穿过组织切片时，染色的电子致密区域会散射更多的电子，而未染色区域则允许电子通过。
探测器收集这些电子信号，生成高分辨率的脑部图像。
与对照组相比，受损脑组织中可见含有大量细胞内包涵体的吞噬性小胶质细胞，这是损伤诱导神经退行性变的典型特征。
将样品装载到扫描电子显微镜（SEM）中时，从转移盒中取出带有切片的载网，将其放入多网格样品 holder 中，并转移至 SEM 的样品腔内。根据文本方案调整探测器后，通过缩小视野使待扫描的整个区域恰好位于图像窗口内，对样品进行预照射。将光阑更改为 120 微米并使图像失焦后，使用减小扫描区域的选项，使扫描区域尽可能紧凑。
接下来，设置帧率以使每帧扫描时间约为1至2秒。然后，至少放大100倍，并对一个小区域扫描十秒钟。如果该区域的亮度仍在变化，则继续进行预照射。当该区域的亮度与其周围环境相比不再发生变化时，即表明预照射已足够。
聚焦后，选择最亮的区域或特征，并设置扫描速度以确保细节清晰可见。在显微镜软件中，通过仔细观察直方图来调节亮度和对比度，使所有像素均处于动态范围内。对最暗的区域和特征重复相同操作。返回明亮区域再次检查，确保直方图两侧均留有一定空间。
对于步骤 4-6 至 4-8，必须非常谨慎地调整亮度和对比度，以确保整个区域处于动态范围之内。
缩小视野，使待扫描的整个区域适配成像窗口，并启动大范围成像程序。然后，使用向导选项，通过从屏幕中选择一个区域来设置图像拼接。
根据所需观察的细节，使用 2 到 5 纳米的像素尺寸，并为扫描透射电子显微镜（STEM）设置 3 微秒的停留时间。点击优化以检查显微镜设置，所需时间将被显示。然后，再次打开外部扫描发生器并点击继续。