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将麻醉后的大鼠固定于立体定位仪中。
去除头皮上的毛发并消毒切口部位。沿中线做切口,牵拉皮肤以暴露颅骨。
去除结缔组织,以避免干扰钻孔操作。以囟门作为参考点,确定位于脑干中的脑桥结构的坐标。
在颅骨上钻一个孔。
通过小孔插入探针以到达脑桥。
接下来,将电极连接到电刺激器上,将阳极连接至用于脑刺激的探针,阴极连接至大鼠的耳部,以形成完整电路。
向脑桥输送电脉冲,诱导局部组织损伤或梗死。
刺激后,将探针短暂保留在原位,以稳定刺激效果。
然后,缓慢取出探针,并用骨水泥封闭手术部位。
缝合切口,将大鼠放回笼中恢复,并进行神经学分析。
在麻醉前立即预热加热垫至37摄氏度,并将颅骨钻安装到立体定位仪支架上的固定座中。确认第一只麻醉大鼠对足底反射无反应后,将大鼠俯卧位固定于加热垫上的立体定位仪中。将耳杆置于耳道上方以固定头部,注意保持颅骨水平,避免注射时发生偏斜。
将药膏涂抹于动物眼部,并使用微型剃刀去除颅骨上的毛发。用记号笔从双侧外眦连线处开始,沿颅骨中线向后画一条3厘米长的线,延伸至后囟后方0.5厘米处,然后使用手术刀沿标记线做正中切口。用棉签清除血液,并在皮瓣两侧各贴一片手术胶带以暴露颅骨。
使用浸有0.9%氯化钠的新棉签轻轻去除颅骨上的结缔组织,并定位前囟。使用细头标记笔在前囟中心点做标记,作为原点。将钻孔位置置于前后方向6毫米、内外侧方向2毫米处。用钻头小心进行直径为1毫米的颅骨开孔。随后,将钻头更换为带有绝缘鞘的22号探针,使探针尖端位于鞘近端上方2毫米处。
将套管插入脑内7毫米深处,然后沿套管推进探针,直至探针顶端位于脑表面下9毫米处。将电极连接至电刺激器,并将阳极连接至探针,再将阴极连接至大鼠耳部。接着打开电刺激器,将单脉冲宽度设为4,050毫秒,电压设为50伏,电流设为4毫安。
刺激后,将探针留置原位5分钟,再将装置从脑部取出。用骨水泥封闭颅骨开窗部位,并在使用4-0聚酰胺缝合线缝合伤口前,等待水泥完全干燥。缝合3至4针后,打2-1-1标准外科结。随后,向大鼠腹腔注射250 µL青霉素,并每15分钟监测一次,直至大鼠完全清醒,再将其放回笼中。