建立斑马鱼幼体药物诱导出血模型

从含有在胚胎培养基中的受精斑马鱼胚胎的培养皿开始。

将培养皿置于体视显微镜下，使用解剖镊子去除包绕胚胎的外层膜，即绒毛膜。

这使得胚胎能够接触到周围的培养基。

将这些去壳的胚胎转移至含有胚胎培养基的培养皿中，该培养基中含有可抑制胆固醇合成的药物，而胆固醇对于维持大脑血管的完整性至关重要。

在受控温度下孵育，直至胚胎发育为幼虫。

随着时间推移，药物渗透到发育中的幼虫体内，抑制胆固醇的合成。

胆固醇缺乏会削弱脑部血管，导致血管破裂并使血液渗入脑组织，形成出血性病灶。

在体视显微镜下观察幼虫。

将具有明显红斑的出血性幼虫与非出血性种群分离。

将这些出血性幼虫转移至新的培养皿中以进行后续研究。

受精后24小时，在明场体视显微镜下，使用锋利的超细解剖镊子去除胚胎的卵膜，以进行阿托伐他汀处理。然后，向两个洁净的培养皿中各加入30毫升E3胚胎培养基，分别用于处理组和对照组。从处理组培养皿中移除60微升胚胎培养液，并加入60微升0.5毫摩尔的阿托伐他汀，以达到80%的幼鱼出血率。

使用巴斯德移液管将100个胚胎尽可能少地带水转移至每个培养皿中。将两个培养皿在28°C条件下孵育。受精后50小时或更晚的任意时间，在显微镜下使用巴斯德移液管小心地将出血的鱼与未出血的群体分离，并将幼鱼转移至含有新鲜E3培养基的新培养皿中。

为了更方便地分离出出血阳性的幼虫，可以使用无色素的鱼或在红细胞中表达荧光蛋白的鱼。