神经前体细胞和神经元中唾液酸糖蛋白的免疫荧光染色

取初级神经干细胞、祖细胞以及神经元，这些细胞的唾液酸糖蛋白已被唾液酸报告分子标记。 

加入多聚甲醛以固定细胞。使用缓冲液去除多余的多聚甲醛。

加入含有生物素标记的化学探针、还原剂和金属催化剂的反应体系中孵育。

还原剂可激活催化剂，促进唾液酸糖蛋白的生物素标记。

移除反应混合物，并用缓冲液洗涤。加入荧光素标记的链霉亲和素以结合生物素化的唾液糖蛋白。

去除未结合的链霉亲和素，并用缓冲液洗涤。加入蛋白质和非离子型去污剂以阻断非特异性结合位点并通透细胞。

移除该溶液，并加入针对特定细胞蛋白的一抗进行孵育。

去除未结合的抗体。

使用荧光标记的二抗和荧光染料孵育，以结合蛋白结合的一抗并标记细胞核。

去除未结合的分子。用缓冲液洗涤。

使用荧光显微镜对细胞成像，以观察荧光标记的唾液酸糖蛋白和细胞蛋白。

首先，从共培养板中取出插入物，并吸除孔底部的培养基。接着，用预热的 PBS 缓冲液清洗神经细胞一次。吸除孔中的 PBS 缓冲液，然后向每个孔中加入 1 毫升预冷的含 4% 多聚甲醛的 PBS 溶液。

在室温下固定细胞10分钟。然后，用预冷的PBS洗涤细胞3次。吸去PBS，向每个孔中加入1毫升新配制的生物素偶联缓冲液I。在室温下孵育10分钟。随后，从孔中吸去反应缓冲液，并用PBS洗涤细胞3次。向每孔细胞中加入1毫升染色缓冲液，在室温下孵育30分钟。

接着，从孔中吸去染色缓冲液，并用预冷的 PBS 洗涤细胞 3 次。向每孔细胞中加入 1 毫升封闭缓冲液，在室温下孵育 10 分钟。移除孔中的封闭缓冲液，向每孔加入 1 毫升一抗溶液。将细胞在 4 摄氏度下孵育过夜。

第二天，从孔中移除一抗溶液。用预冷的 PBS 洗涤细胞三次。吸去孔中的 PBS，每孔加入 1 毫升二抗。在室温下孵育细胞 2 小时。之后，吸去孔中的溶液，并用预冷的 PBS 洗涤细胞三次。