人脑皮层切片中β-淀粉样肽的可视化

取一张载玻片，其上含有从阿尔茨海默病患者脑组织中采集的皮质切片。该组织实质内及脑微血管中存在不溶性淀粉样β沉积物。

将切片浸入稀释的酒精中以去除脂质和盐分。

用无水乙醇洗涤以脱去组织中的水分，然后使用固定剂保存组织结构。

将玻片进行真空干燥，去除所有水分。

在加湿环境中用甲酸蒸气处理，将淀粉样蛋白β聚集体分解为更小的可溶性肽段。

使用光学扫描仪生成组织结构特征的图像，以解读成像质谱数据。

将基质溶液喷洒在样本上。

使用质谱仪，施加一种基质可吸收的激光以使肽离子化。随后，检测器根据其质荷比对这些肽进行鉴定。

分析数据以生成图像，揭示淀粉样蛋白β肽在组织实质和脑毛细血管中的分布情况。

为清洗组织切片，将样本浸入盛有40至100毫升70%乙醇的玻璃染色缸中，持续30秒，以去除内源性脂质和无机盐。按照文本方案中列出的洗涤程序清洗样本。随后，在真空条件下干燥样本30分钟。

现在，使用甲酸蒸气处理组织切片，以促进从尸检脑组织中更有效地电离淀粉样蛋白β。具体操作如下：将烘箱预热至60摄氏度，并准备一个含有5毫升100%甲酸的玻璃孵育皿。保持玻璃孵育皿内的空气湿度处于饱和状态。

将组织切片放入孵育玻璃皿中，避免浸入甲酸，处理六分钟。使用胶片扫描仪、凝胶扫描仪或数字显微镜对样品进行光学成像。此步骤在室温下进行。

当样本靶标置于仪器内部时，必须对样本的光学图像进行对齐。通常情况下，将无法识别基质层下方的组织切片。为了将光学图像与样本对应起来，需在光学图像以及基质层下方的相机光学视野中均可见的位置制作导向标记。最简便的方法是在拍摄光学图像前，在样本周围至少涂抹三个修正液标记点。

使用超声波喷雾器喷涂基质时，将待喷涂的组织从干燥器中取出，并放入腔室内。确保组织未覆盖传感器窗口。通过按下开始按钮启动准备程序。通常，准备时间约为90分钟。

该制备过程将自动进行调控 通过 监测基质层的厚度和湿润度。或者，使用自动喷雾器将基质溶液喷洒在组织表面时，可采用设定为10 PSI和每分钟0.15毫升的溶剂泵系统输送基质溶液。

加热的鞘气将与基质溶液喷雾同时持续输送。使用MALDI-IMS进行高通量、高空间分辨率的成像实验。进行质谱测量时，使用MALDI控制软件和数据分析软件定义组织区域。

以2,000至20,000的质荷比范围和20及100微米的空间分辨率，采用正线性模式采集谱图。配制校准标准品时，将肽段校准标准品按1:4的比例溶于含CHCA的TA30溶液中的蛋白质校准标准品中，然后将其稀释10倍。

在载玻片上四个不同位置各放置1微升校准标准品。使用分子组织学软件，叠加多个信号图像以分析各种信号的空间相关性，例如不同淀粉样蛋白β肽在动脉壁老年斑中的共定位情况。