在大鼠模型中检测脑微出血

脑微出血（CMHs）是由于血脑屏障破坏导致红细胞（RBCs）渗入脑组织而引起的神经炎症性脑出血。

为了检测脑微出血，首先获取患有脑微出血的大鼠的固定脑组织。

将组织浸入蔗糖中以进行冷冻保护。

使用冷冻切片机对组织进行切片，并将切片收集到载玻片上。

洗涤以去除残留的固定剂。

使用与金属阳离子结合的苏木精染料，该染料可与带负电荷的DNA相互作用，使细胞核染成紫红色。

随后用酸性酒精洗去多余的染料，再加入碱性蓝化剂以中和酸性环境，并使染料转化为蓝色形式，从而增强对比度。

用酒精清洗组织以增强染色剂的渗透性，然后加入伊红将红细胞染成红橙色，组织成分染成粉红色。

使用梯度酒精脱水，并用二甲苯透明处理，以便显微镜下观察组织。

拍摄图像以检测呈红橙色的渗漏红细胞，从而确认慢性微出血（CMHs）。

分离脑组织后，将其浸入含20%蔗糖的PBS溶液中至少六小时，或直至脑组织沉入管底。随后更换为30%蔗糖溶液，继续固定六小时。

最后，使用冷冻切片机制备10毫米厚的脑组织切片。先将载玻片在蒸馏水中清洗，开始进行苏木精-伊红（H&E）染色。随后将切片浸入苏木精染色液中8分钟。染色后，用流动的自来水冲洗5分钟。接着用1%酸性乙醇分化30秒。

用流动的自来水冲洗1分钟后，用0.2%氨水或饱和碳酸锂溶液染色30秒至1分钟。接着，用流动的自来水冲洗5分钟。用伊红溶液复染30秒至1分钟。依次经90%乙醇、95%乙醇和无水乙醇脱水，每次0.5至2分钟。

脱水后，用二甲苯透明30秒。封片后，使用明场荧光显微镜分析H&E染色结果。H&E染色下，从血管中释放出的红细胞（为CMHs的组成部分）呈红橙色。