一种人诱导多能干细胞来源神经元的体外拉伸损伤模型

从一个与硅胶膜相连的多孔无底板开始。该膜上涂有生物聚合物，以促进细胞黏附。

将悬浮在培养基中的人诱导多能干细胞来源的神经元（hiPSCNs）接种至孔板中。该培养基中添加了细胞外基质（ECM）蛋白，以增强细胞黏附。

孵育培养板，使细胞黏附于细胞外基质蛋白和生物聚合物上，促进细胞与膜表面的均匀相互作用。

接下来，将培养板固定在损伤装置的载物台上。

使用该装置对膜进行压痕处理，以在神经元上施加可控的机械应力。

应激会破坏细胞骨架，导致称为神经突的细胞突起发生退化，并沿神经突形成小的肿胀。

这种胁迫还会破坏细胞膜的完整性，导致细胞死亡。

表现出拉伸损伤表型的hiPSC衍生神经元现已准备好进行分析。

为拉伸培养板，将“位置追踪”虚拟仪器中的“文件名”和“文件路径”字段更改为唯一的文件名，然后点击运行箭头。在运动控制面板虚拟仪器的“损伤深度”和“损伤持续时间”字段中设置压痕的深度和持续时间。将培养板置于零位置后，运行“运动控制面板”虚拟仪器，然后点击损伤以对培养板进行压痕操作。

单击顶部以使载物台上升，当培养板到达顶部位置时单击停止，然后打开门以使损伤装置失活。随后，检查“位置追踪器”虚拟仪器中显示的载物台位移历史，以确认已施加指定的最大位移，并将数据导出至适当的电子表格程序。

为了评估等离子体处理后硅胶膜的拉伸情况，将培养板放置在柔软的表面上，并用永久性记号笔的墨水润湿打孔器上的小突起。将打孔器插入第一个待测孔中，并轻敲以确保墨水良好转移。当所有孔均完成打孔后，将高速摄像机置于支架臂上，正对损伤装置上方，将镜头光圈调至最小编号档位，使视野中包含以3行4列网格排列的12个压痕器。

将平板置于零点位置后，单击相机软件上的记录按钮，使其显示“触发输入”，然后打开明亮、漫射的轴向光源，接着如前所述对平板施加压痕，再关闭轴向光源。

为了对细胞培养物造成损伤，将100微升经层粘连蛋白处理的人诱导多能干细胞来源的神经元加入等离子体处理过的培养板的每孔中，在室温下孵育15分钟，使细胞贴附于培养板底部，然后将培养板放入细胞培养箱中。培养2至3天后，将培养板固定在损伤装置的载物台上，并调整盖子的位置，确保培养板固定且培养物不暴露于环境空气中。随后，将培养板置于零点位置，按照前述方式对培养板进行压痕操作。