利用局灶性激光损伤建立斑马鱼视网膜变性与再生模型

从一条已麻醉的成年斑马鱼开始。

将鱼转移到硅胶固定架上，并在眼部涂抹一层合成聚合物以润滑。

接下来，将激光透镜置于眼前，以将激光瞄准光束聚焦于视网膜上。

将激光照射到斑马鱼的眼睛，诱导视网膜损伤。

激光诱导产生热损伤并导致视网膜感光细胞死亡，从而启动一个持续数天的退行性过程，该过程从视网膜色素上皮层延伸至外丛状层。

作为反应，穆勒胶质细胞（MG）会发生反应性胶质化，表现为细胞肥大和增殖。

这些细胞随后去分化为干细胞前体。

前体细胞逐渐迁移至损伤部位，并在微环境提供的时空信号引导下，在数天内分化为成熟的视网膜细胞类型，从而促进视网膜结构的再生。

通过将400毫克三卡因粉末溶解于97.9毫升养殖水和2.1毫升1摩尔TBS中，配制麻醉剂储备液。用pH为9的1摩尔Tris溶液调节pH至7.0。将三卡因储备液按1:25比例用养殖水稀释，制得工作液，并转移50毫升至培养皿中。然后将斑马鱼放入麻醉液中2至5分钟，直至其不再活动且对外界刺激无反应。

用手将每条鱼转移至定制的硅胶固定针架中，以进行激光处理。

适当的麻醉对于动物的福利和手术的成功至关重要。因此，必须使用 freshly prepared tricaine 溶液，且动物离水时间不应远超 10 分钟。

将532纳米半导体激光器的输出功率设置为70毫瓦，脉冲持续时间为100毫秒，光束直径为50微米。然后向眼内滴入1至2滴2%羟丙基甲基纤维素。

将甲基纤维素应用于眼部时，应确保粘稠溶液不接触鳃部。

接下来，使用2毫米的眼底激光镜片将激光瞄准光束聚焦于视网膜上。在左眼视神经周围放置四个激光光斑，并以右侧未经处理的眼作为内部对照。