直接立体定位脑内注射淀粉样蛋白-β构建阿尔茨海默病模型

从一只颅骨暴露的麻醉小鼠开始。将小鼠固定在立体定位架上，架上装有一支预先装有易聚集淀粉样β蛋白的注射器。

标记前囟，这是确定蛋白质输注坐标的關鍵参考点。

移动注射器，依次接触前囟和后囟，以确定背腹向坐标，确保针头深度精确。

将注射器重新定位至预设的内侧-外侧坐标上方，靶向齿状回，该区域对记忆处理至关重要。

触碰颅骨表面，确保背腹向坐标在限定范围内，并做标记。在对侧重复此操作。

在标记的内侧-外侧坐标处钻孔，将淀粉样蛋白β注入齿状回，并停留以防止回流。

在对侧钻孔并注射淀粉样蛋白β，以实现蛋白质的均匀分布。

取下小鼠的耳杆，然后缝合切口。

随着时间推移，β-淀粉样蛋白聚集形成斑块，导致齿状回神经元退化，干扰记忆处理过程，从而引发阿尔茨海默病。

使用手术刀在头皮正中线处做一个2至3毫米的切口。用直的精细剪刀将切口延长至约1.0厘米，以暴露颅骨的矢状缝、前囟和人字缝。随后，用镊子将皮肤分开。

使用浸有无菌生理盐水的无菌棉签清洁颅骨，然后用干净干燥的棉签将颅骨擦干。接下来，在前囟点标记一个点。使用显微操作仪定位汉密尔顿注射器，使针尖恰好接触前囟点上的标记点，随后记录背腹（DV）坐标。

在人字缝点处标记一个点。通过将注射器向人字缝点后方移动，确保颅骨的前后轴处于水平位置。针尖应接触人字缝点，如同其之前接触前囟点一样。随后记录背腹向（DV）位置。前囟点与人字缝点的背腹向坐标应相差在0.5毫米以内。

现在，将针尖返回至前囟点。记录起始的前后（AP）位置。然后，通过从起始AP坐标减去2毫米来计算终止的AP位置，并将注射器针头重新定位至最终的AP坐标。

接下来，记录当前的冠状面（ML）坐标。通过在起始冠状面（ML）坐标上加减1.3毫米，计算左右终点的冠状面（ML）坐标，并将注射针移动至终点的冠状面（ML）坐标位置。将针尖轻触颅骨表面两侧终点的冠状面（ML）坐标点，并确保垂直（DV）坐标误差在0.5毫米以内。

当到达ML坐标的终点时，将针头从颅骨上方上提0.5至1厘米。使用深色超细笔在颅骨上标记一个点。对侧颅骨重复此步骤。然后移开注射器。

使用0.8毫米钻头在颅骨左侧或右侧的ML坐标处钻孔。对对侧重复此步骤。随后，将注射器移至其中一个新钻的孔。将针头缓慢下降至刚穿过颅骨的位置，注意不要刺破脑组织。

为确保针头已穿过颅骨，应轻柔地将针头抵住颅骨，确认针头不会从孔中脱出。接着，记录起始的DV坐标。通过从起始DV坐标减去2.2毫米，计算出终止的DV坐标，并将针头降至该终止DV坐标位置。

然后，将立体定位注射泵设置为以每分钟0.5微升的速度向齿状回注入4微升的Aβ_1-42。注射完成后，让针头在原位停留额外1分钟，以尽量减少溶液从注射部位回流。随后，将针头移至大脑另一侧，并重复上述操作。

现在，拧松耳杆。使用学生标准型镊子将头皮拉拢，然后用缝线封闭伤口。取下鼻罩，移出小鼠。