胚胎小鼠胃肠道神经元群体的免疫荧光染色

0 次观看2:58 分钟 • July 8th, 2025

在所需发育阶段,取一段固定的转基因小鼠胚胎胃肠道。

胃肠道的肠神经系统包括肠神经元和表达胆碱乙酰转移酶的胆碱能神经元。

这些胆碱能神经元还表达由胆碱乙酰转移酶启动子驱动的荧光蛋白。

使用非离子型去污剂和蛋白质孵育组织,以通透细胞并防止非特异性抗体结合。

加入一抗。孵育,使抗体分别与神经元中的靶蛋白结合。

去除未结合的抗体,并用缓冲液洗涤。

使用荧光染料标记的二抗孵育,以特异性结合已与目标蛋白结合的一抗。

去除多余的抗体,并用缓冲液洗涤。

将标记的组织浸入含有细胞核染料的封片剂中,以染色细胞核。然后,盖上盖玻片。

利用共聚焦显微镜观察并分析胃肠道中胆碱能神经元的分布。

将胃肠道组织放入含有封闭液的0.2毫升离心管中,封闭液成分为1×PBS、3%牛血清白蛋白、0.1% Triton X-100,于室温孵育1小时。封闭结束后,用细尖巴斯德吸管吸除封闭液,并替换为用封闭液按最佳稀释比例稀释的一抗溶液。

在摇床上于室温孵育4小时,或于4摄氏度过夜。一抗孵育结束后,吸去抗体溶液,用PBS冲洗消化道,每次5分钟,共冲洗3次,随后在室温下于摇床上继续孵育1小时。

最后一次洗涤后,将 PBS 替换为用封闭液稀释的荧光染料标记的二抗,将试管置于摇床上,室温避光孵育 4 小时,或 4 摄氏度避光孵育过夜。

按照之前的方法清洗消化道后,在载玻片上滴加数滴含 DAPI 的荧光封片剂,然后将消化道浸入封片剂中,并加盖盖玻片。最后,使用共聚焦显微镜采集每种荧光染料的图像,再利用适当的软件进行计算机辅助图像分析。

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最后更新:29 八月 2026