利用延时成像技术监测朊病毒样蛋白在转基因线虫中的跨细胞传播

选取处于相同发育阶段的转基因线虫。

这些线虫的体壁肌细胞表达类朊病毒蛋白，该蛋白被标记了红色荧光蛋白，并定位于酸性囊泡内。

朊病毒样蛋白是一类错误折叠并发生聚集的蛋白质，与神经退行性疾病相关。

接下来，将线虫转移至含有聚合物纳米颗粒和麻醉溶液的琼脂糖垫上。

纳米颗粒与麻醉溶液的共同作用使线虫在琼脂糖垫上 immobilize。

将盖玻片盖在琼脂糖垫上并封固。

现在，将带有线虫的琼脂糖垫组件置于共聚焦显微镜下，并设置适当的成像参数。 

获取线虫体内荧光标记蛋白的时间序列图像，以监测类朊病毒蛋白在体壁肌细胞内及细胞间的囊泡运输过程。

在制备同步化的C. elegans对照组和含朊病毒结构域的转基因品系，并按照配套文本方案制备10%琼脂糖垫后，用移液器将3微升100纳克的聚苯乙烯微珠和3微升4毫摩尔的左旋咪唑加入琼脂糖垫上。使用铂金丝挑取工具，将目标年龄的线虫从培养皿转移至该溶液中，然后加盖盖玻片。

为了在亚细胞水平上对线虫进行成像，将载玻片放入共聚焦显微镜的载物台插槽中，并使用 63X 或 100X/1.4 NA 油镜物镜。接着，打开 MetaMorph 软件，选择“多维采集”功能，在主选项卡下勾选“时间序列”和“运行日志”。在“保存”选项卡下，选择或创建用于保存文件的目录文件夹，并为文件命名。

在“波长”选项卡下，使用“YokoQuad Red”或等效的MRP成像照明光源，将曝光时间调整为100至300毫秒之间，相机增益调整为100至300之间。接着，在“时间序列”选项卡下，将时间间隔设置为1秒，“持续时间”设置为5分钟，“时间点数量”设置为301。

在“期刊”选项卡中，为期刊选择“AFC SET Z HOLD”和“AFC Return to Z HOLD”。在“类型”中，两次选择“Special”；在“起始点”中，选择“时间点开始”和“时间点结束”。设置完成后，点击“采集”。