0 次观看 • 2:18 分钟 • July 8th, 2025
取一个用缓冲液灌注的小鼠大脑。
大脑被感染了耐链霉素的Listeria monocytogenes,这是一种致病性细菌。
灌注步骤可清除脑组织中的血液,确保细菌负荷量的测量结果真实反映组织中Listeria monocytogenes的载量。
接下来,使用无菌匀浆器匀浆脑组织,以破坏组织并释放细菌。
现在,使用缓冲液对脑匀浆进行连续稀释。
将这些稀释液接种于含有链霉素(一种抗生素)的脑心浸出液琼脂平板上。
将平板进行孵育。脑心浸液琼脂为单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的生长提供营养,而链霉素则用于筛选耐药菌株,仅允许耐链霉素的李斯特菌(Listeria)形成菌落。
计数平板上的菌落数量,以确定菌落形成单位,该指标用于衡量脑组织中具有活性的感染性细菌载量。
用镊子打开颅骨以暴露脑组织,将刮勺置于脑组织下方与颅底之间,小心地将脑组织转移至含有 5 毫升 4 摄氏度 PBS 的 15 毫升离心管中。
在生物安全柜中,将探头依次插入含有5%次氯酸钠、无菌水、75%乙醇和无菌水的四个独立的15毫升锥形管中,每个溶液中使用组织匀浆器运行10秒。待探头彻底灭菌后,在其原管中匀浆感染的脑组织。
将每种器官匀浆液用无菌 PBS 进行十倍系列稀释,并将稀释液接种于脑心浸出液琼脂平板上。随后,将匀浆液稀释样本的培养物在 37 摄氏度下培养过夜,计数每个平板上的菌落数,以确定每器官或每毫升血液中的细菌总数。
本文展示了一种定量检测感染后小鼠灌注脑组织中单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染性细菌载量的实验方案。该方法包括精细的组织处理、选择性平板接种以及菌落计数,以准确评估感染后脑组织中的细菌负荷。
定量测定灌注小鼠脑组织中的细菌定植情况,可实现对感染动态及组织特异性病原体负荷的精确诊断。该工作流程有助于在感染性疾病模型中进行机制性风险评估,并为宿主-病原体相互作用研究中的靶点验证提供依据。准确的细菌载量测定对于抗感染药物研发中的转化医学研究及研发管线决策至关重要。
该方法可融入传染病发现的整个流程,从早期假设验证到临床前模型验证及转化研究。
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最后更新:29 八月 2026