评估小鼠大脑中细菌定植情况 单核细胞增生李斯特菌 感染

取一个用缓冲液灌注的小鼠大脑。

大脑被感染了耐链霉素的Listeria monocytogenes，这是一种致病性细菌。

灌注步骤可清除脑组织中的血液，确保细菌负荷量的测量结果真实反映组织中Listeria monocytogenes的载量。

接下来，使用无菌匀浆器匀浆脑组织，以破坏组织并释放细菌。

现在，使用缓冲液对脑匀浆进行连续稀释。

将这些稀释液接种于含有链霉素（一种抗生素）的脑心浸出液琼脂平板上。

将平板进行孵育。脑心浸液琼脂为单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）的生长提供营养，而链霉素则用于筛选耐药菌株，仅允许耐链霉素的李斯特菌（Listeria）形成菌落。

计数平板上的菌落数量，以确定菌落形成单位，该指标用于衡量脑组织中具有活性的感染性细菌载量。

用镊子打开颅骨以暴露脑组织，将刮勺置于脑组织下方与颅底之间，小心地将脑组织转移至含有 5 毫升 4 摄氏度 PBS 的 15 毫升离心管中。

在生物安全柜中，将探头依次插入含有5%次氯酸钠、无菌水、75%乙醇和无菌水的四个独立的15毫升锥形管中，每个溶液中使用组织匀浆器运行10秒。待探头彻底灭菌后，在其原管中匀浆感染的脑组织。

将每种器官匀浆液用无菌 PBS 进行十倍系列稀释，并将稀释液接种于脑心浸出液琼脂平板上。随后，将匀浆液稀释样本的培养物在 37 摄氏度下培养过夜，计数每个平板上的菌落数，以确定每器官或每毫升血液中的细菌总数。