饮食诱导肥胖斑马鱼中食欲素与大麻素受体共定位的检测

在斑马鱼大脑中，神经元表达调节代谢的食欲素和大麻素受体。

在饮食诱导肥胖（DIO）的斑马鱼中，这些受体越来越多地共定位于一起形成异源二聚体，从而改变下游信号传导并影响代谢调控。

取对照组和饮食诱导肥胖（DIO）斑马鱼的脑组织冰冻切片。用缓冲液洗涤切片以去除包埋介质。

使用通透-封闭缓冲液处理，以通透细胞膜并封闭非特异性结合位点。洗涤以去除多余的缓冲液。

加入靶向受体的一抗混合液进行孵育。洗去未结合的一抗。

使用可与一抗结合的不同荧光染料标记的二抗进行孵育。洗涤以去除未结合的抗体。

加入荧光DNA结合染料以标记细胞核。然后，加入封片介质，并用盖玻片封片。

使用共聚焦显微镜检测抗体荧光。与对照组相比，DIO 斑马鱼中抗体共定位增加表明受体异源二聚化程度更高。

首先，用 0.1 摩尔磷酸缓冲液将切片冲洗三次，每次 5 分钟。将一抗混合物加入到 lutetium PBT 中，并将切片在室温下的湿盒中孵育过夜。第二天，用 0.1 摩尔磷酸缓冲液将切片冲洗三次，每次 5 分钟。将切片在室温下用适当稀释于 PBT 中的二抗混合液孵育 2 小时。

用 0.1 摩尔磷酸缓冲液将切片冲洗三次，每次 5 分钟。将 1.5 微升 DAPI 溶解于 3 毫升磷酸缓冲液中，配制核染料 DAPI。用该染料对切片进行复染，然后使用封片介质将盖玻片封固在载玻片上，以稳定组织和染色，便于长期保存。荧光样品可于 4 摄氏度避光保存。