研究FITC和FITC-铁蛋白通过体外血脑屏障模型的渗透性

从一个含有体外血脑屏障（BBB）模型的多孔板开始。

该模型由黏附在基质包被的膜插件上层（即血液侧）的内皮细胞和下层（即脑侧）的星形胶质细胞组成。

向对照孔的上室中加入荧光素异硫氰酸酯（fluorescein isothiocyanate）或 FITC 这种荧光染料。

相反，将载有FITC的铁蛋白（FITC-铁蛋白）加入样品孔的上室，然后进行孵育。

在对照孔中，游离的 FITC 保留在上室，极少穿过血脑屏障（BBB）。

与此同时，在样品孔中，FITC-铁蛋白复合物与内皮细胞上的受体结合。

这允许受体介导的内化作用以及向下方腔室的转运。

接下来，定期从两个孔的下室收集培养基，并测定荧光强度。

对照组荧光较弱，而样品组荧光较强，证实了FITC与FITC-铁蛋白在血脑屏障通透性上的差异。

为了测量FITC-铁蛋白通过血脑屏障系统的通量，将负载FITC的铁蛋白或游离FITC分别加入至少三个血脑屏障系统的上室，每个制剂至少设置三个重复。

在培养箱中孵育 7 小时后，从三个样品和对照插入物的下室中各吸取 2 毫升培养基。取 500 微升收集的样品，用荧光分光光度计测定其荧光强度，并根据书面实验方案中的说明，确定透过 FITC 或 FITC-铁蛋白的浓度。