为什么大脑前动脉的纤维穿孔对靶点验证具有重要意义？

大脑前动脉穿孔可实现蛛网膜下腔出血的可控诱导，这对于验证与出血诱导的神经损伤及病理生理通路相关的靶点至关重要。

颈动脉的暂时性阻断如何支持发现流程的工作流程？

暂时阻断颈总动脉和颈内动脉可限制血流，以促进微丝的顺利推进和精确穿孔，从而支持在早期研究中实现标准化模型的建立。

在出血模型中，临床症状观察能够实现哪些定量测量？

观察到肌肉震颤、瞳孔缩小、喘息、心律改变和尿失禁可提供可量化的二元终点指标，以确认出血诱导成功及模型的有效性。

为什么在出血建模中，可重复性要求对于跨职能协作至关重要？

重复性可确保在不同研究中一致地诱导出血，从而在发现研究、毒理学和转化研究团队之间实现可靠的数据共享，以支持统一的决策（推进/终止）。

在将该出血模型用于筛选之前，需要具备哪些统计分析能力？

实施需要具备分析发病率、症状严重程度评分和神经学结局分布的能力，以确立模型的稳健性和检测变异性的阈值。

通过血管内穿刺法在小鼠模型中诱导蛛网膜下腔出血

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 4:43 分钟 • July 8th, 2025

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取一只颈部已剃毛的麻醉小鼠。

消毒颈部并做正中切口。

暴露颈总动脉（CCA），其分支为颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。

结扎颈外动脉（ECA），并暂时阻断颈总动脉（CCA）和颈内动脉（ICA），以限制血流。

切开颈外动脉（ECA），插入丝线，并将其推进至颈总动脉（CCA）。

重新开放CCA和ICA以恢复血流。将丝线经ICA引导至脑部，穿刺大脑前动脉（ICA的一个分支）。

穿孔会导致出血或蛛网膜下腔出血，即血液进入脑部周围充满液体的区域。通过观察临床症状来确认出血情况。

夹闭颈外动脉（CCA）以阻断血流，移除栓线，并结扎颈外动脉（ECA）切口。

重新开放 CCA 以继续进行蛛网膜下腔出血。

缝合皮肤，并让小鼠恢复以进行后续分析。

首先剃除小鼠颈部的毛发。操作过程中使用眼用软膏。用70%乙醇对皮肤进行消毒，随后使用聚维酮碘或氯己定，并局部应用1%利多卡因。将小鼠置于仰卧位，使其头部和躯干朝上。

使用胶带固定小鼠的四肢，使其背侧朝上。拉伸颈部皮肤并将其提起，从下巴处沿中线切开至胸骨上缘，展开颈部皮肤，分离唾液腺与周围结缔组织。沿气管一侧分离肌肉，暴露颈总动脉鞘。

使用拉钩或无菌纱布暴露手术视野，分离颈动脉，并留置一根未结扎的8-0丝线，注意避免损伤迷走神经。解剖颈外动脉（ECA）的远端，并在远端位置对血管进行两次结扎。

在双重结扎的血管段中点处，分离颈外动脉（ECA）并形成血管残端。在颈内动脉（ICA）周围留置丝线缝合线，但暂不结扎。预先在颈外动脉残端周围放置一个用于固定栓线的结扎线。在成功插入栓线之前，不要结扎该线。

使用缝线或微型夹暂时闭合颈内动脉（ICA）和颈总动脉（CCA）。用显微血管剪在颈外动脉（ECA）上做一切口，插入5-0（或 alternatively 4-0）聚丙烯尼龙线丝，然后将其向前推进至CCA。在松开ICA和CCA上的微型夹的同时，结扎ECA的结扎线。

轻轻回拉尼龙线，同时将颈外动脉残端向颅侧调整，使尼龙线经分叉处进入颈内动脉。将尼龙线尖端以与气管中线及水平面约30度的角度向内侧置入，并推进至颈内动脉内。

在前 cerebral 动脉（ACA）与中 cerebral 动脉（MCA）分叉处可观察到阻力。将线栓向前推进至多 3 毫米，穿破右侧 ACA。迅速将线栓撤回至颈外动脉（ECA）残端，使血液流入蛛网膜下腔。将线栓在此位置留置 10 秒后撤出。为避免大量失血，可预先暂时闭合颈总动脉（CCA）。随后，完全撤出线栓。

使用预先放置的缝线结扎ECA，并在之前已结扎的情况下重新开放CCA。肌肉震颤、同侧瞳孔缩小、呼吸急促、心律改变以及尿失禁等现象可作为手术成功的辅助证据。确保无出血渗漏，并对皮肤进行消毒。缝合切口，将小鼠置于保温箱中，等待动物恢复足够的意识以维持胸卧位。