皮质类器官切片中神经元衰老的检测

从一张载玻片开始，该载玻片包含一个皮质类器官的薄切片，其中含有处于不同衰老阶段的胶质细胞和神经元。

衰老的神经元处于细胞功能衰退的衰老状态，含有高水平的β-半乳糖苷酶。

用固定剂对切片进行预处理，以稳定细胞结构，并使用通透剂对细胞膜进行通透处理。

将玻片放入染色容器中，用缓冲液洗涤以去除任何溶液残留。

用含有β-半乳糖苷酶底物的溶液对玻片进行染色，并孵育。

底物进入细胞后，β-半乳糖苷酶将其切割，生成一种蓝色产物，该产物在衰老的神经元中积累更多。

反复洗涤该切片。

加入抗荧光淬灭封片剂，并使其凝固，以确保染色切片的完整性。

在显微镜下观察切片；呈现深蓝色产物的区域表明类器官中的衰老神经元。

类器官冷冻切片后，将载玻片转移至带盖的载玻片存放容器中以去除多余的封片液，并用 PBS 在室温下洗涤切片类器官组织三次，每次 10 分钟。随后，将载玻片在 37 摄氏度下与新鲜配制的 β-半乳糖苷酶染色液孵育过夜。染色完成后，在室温下用 PBS 洗涤组织三次，每次 10 分钟，以去除 β-半乳糖苷酶溶液。

现在，使用玻璃防淬灭封片剂封固已洗涤的组织，并在室温下静置30分钟，待封片剂凝固后，再在显微镜下观察。