大鼠海马切片中中间神经元的免疫染色

取一个含有生物胞素（biocytin）灌注的中间神经元的固定大鼠海马切片，生物胞素是一种与生物素结合的分子。

接下来，加入含有封闭蛋白和非离子型去污剂的溶液，以防止非特异性结合并通透神经元。

使用靶向中间神经元上特异性大麻素受体的一抗进行孵育。

用缓冲液洗涤以去除过量的抗体。

然后加入链霉亲和素偶联的荧光染料和荧光素偶联的二抗。

孵育期间，链霉亲和素与生物胞素强效结合，从而实现对含生物胞素的中间神经元的可视化，而二抗则靶向结合于中间神经元上受体处的受体特异性一抗。

用缓冲液冲洗，去除未结合的分子。

现在，使用水溶性封片剂封片。放置盖玻片并封固。

使用荧光显微镜观察填充了生物胞素的中间神经元及大麻素受体的表达，从而分析该中间神经元的形态及其受体分布情况。

在室温下用 10% 封闭血清封闭组织 1 小时。随后，在室温下将切片与一抗 CB1R 孵育过夜，以检测 1 型大麻素受体的表达。然后，用 0.1 mol PBS 洗涤脑切片，每次 10 分钟，共洗涤 3 次。将链霉亲和素及针对第一种一抗的二抗同时加入孔板中，于 4°C 下孵育过夜。

随后，将切片置于链霉亲和素红色染料偶联物中，在4°C避光条件下孵育过夜，以显示生物胞素。接着，用0.1摩尔PBS缓冲液将脑切片洗涤三次，每次10分钟。为保护荧光信号并便于将来重新染色，将切片封片于水性封片剂中，并用透明指甲油密封盖玻片边缘。