人直肠抽吸活检组织切片中S-100蛋白的免疫组织化学染色

取固定的人直肠吸引活检切片，其中暴露了蛋白抗原并灭活了内源性过氧化物酶。

加入封闭液以防止非特异性抗体结合。

用可结合靶向胶质细胞蛋白 S-100（先天性巨结肠症标志物）的一抗抗体替换封闭液。

去除未结合的抗体，并与过氧化物酶聚合物孵育以扩增信号。

洗涤以去除过量的聚合物。加入可与酶聚合物和一抗结合的二抗。

去除未结合的抗体，并加入显色底物。

过氧化物酶与底物反应，形成有色沉淀物。

冲洗以去除过量沉淀物。

加入染料以染色细胞核。

用酸性乙醇溶液清洗以去除多余的染料。

接下来，使用浓度递增的乙醇脱水，然后用二甲苯处理切片。

最后，将样品制片并在显微镜下观察，以检测染色情况，从而指示目标蛋白的存在。

弃去多余的牛血清白蛋白，每张切片加入 50 µL 目标一抗，在 4 °C 下孵育过夜。次日早晨，用 PBS 洗涤切片三次，每次 3 分钟，然后每张切片加入 50 µL 聚合物增强剂。在 37 °C 孵育 20 分钟后，用 PBS 洗涤切片三次，每张组织切片加入 50 µL 二抗 B。

在37摄氏度孵育30分钟后，用PBS洗涤切片三次，每次五分钟，然后在每张切片上加入一滴新配制的DAB工作液。当在光学显微镜下观察到适当的棕褐色染色程度时，将切片在PBS中冲洗五分钟，并用一滴苏木精对细胞核复染一分钟。

在流水下冲洗约 30 至 40 秒以去除多余的染液，随后用新鲜 PBS 洗涤 25 至 30 秒。用 1% 盐酸乙醇分化组织 10 秒，然后用 PBS 洗涤一分钟。

将载玻片依次用与水化相反的顺序进行五分钟浸洗脱水，并将载玻片置于二甲苯中更换两次，每次五分钟。然后使用超净封片剂封片，待载玻片干燥后，置于光学显微镜下观察。