0 次观看 • 3:55 分钟 • July 8th, 2025
将一只麻醉的小鼠 果蝇 幼虫头部朝上位于载玻片的油滴中，载玻片上含有真空脂斑点。
放置盖玻片，并轻轻按压使其与幼虫接触。
调整幼虫位置，以暴露表达荧光蛋白的目标神经元所在区域。
将载玻片固定在双光子显微镜上。
使用低功率激光以最小化损伤，并扫描幼虫以定位发出荧光的目标神经元区域。
接下来，调整扫描窗口，以聚焦于包含轴突（一种神经元投射）的目标区域。
现在，降低扫描速率并增加激光功率。
高功率激光将照射目标轴突，产生局部热量以损伤轴突，并增强损伤部位周围的荧光信号。
最后，切换回低功率激光模式。损伤部位出现小的凹坑状、环状结构，表明神经元损伤成功。
首先对幼虫进行麻醉。在通风橱内，将一个60毫米的玻璃培养皿放入一个15厘米的塑料培养皿中。然后将一张滤纸对折，放入玻璃培养皿内。在加入乙醚后，将葡萄琼脂平板放置在滤纸上。接着，在载玻片中央滴加一滴卤碳油27，再于载玻片的四个角各涂上一点真空脂。
然后，使用镊子将一条幼虫转移到 agar 平板上，并盖上玻璃皿以麻醉幼虫。一旦幼虫停止活动，立即将其小心转移至卤代烃油中，保持头部朝上。接着，将盖玻片盖在载玻片上，轻轻下压，直至盖玻片接触幼虫。随后，施加轻柔的力量推动盖玻片，使待消融的细胞滚动至双光子激光最易照射到的位置。具体位置将根据所靶向的神经元而有所不同。
现在，将组装好的样品固定在双光子显微镜的载物台上，使用40倍油浸物镜对目标细胞进行聚焦。在软件中切换至扫描模式，并加载之前保存的实验程序。确保针孔完全打开。然后，在实时模式下获取目标区域的清晰图像。接下来，停止实时扫描，以使裁剪按钮变为可用。利用裁剪功能，调整扫描窗口，将扫描区域聚焦于预定的损伤位点。
然后打开一个新的成像窗口。现在降低扫描速度，并增加激光强度。接着点击连续扫描按钮以开始和停止扫描。仔细观察，一旦荧光出现显著增强，立即结束扫描。接下来，切换回原始的成像窗口，选择实时模式，并通过调节焦距找到刚刚被靶向的区域。
成功造成损伤的一个良好迹象是在损伤部位出现一个小的凹坑、环状结构或局部碎屑。如果激光功率过高，则会看到较大的损伤区域，这可能是致命的。