使用流式细胞术测量神经元中的多个线粒体参数

0 views • 2:09 min • July 8th, 2025

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将固定和透化的神经元放入管中。

添加封闭缓冲液以防止非特异性抗体结合。

心悬浮液并除去上清液。然后,将神经元重悬于缓冲液中。

悬浮液均匀转移到含有未标记和荧光团标记的一抗的试管中。

孵育,使抗体与神经元内的线粒体呼吸链或MRC复合物亚基、线粒体DNA相关蛋白和线粒体外膜蛋白特异性结合。

去除任何未结合的抗体。

与与未标记的一抗结合的荧光团标记的二抗孵育。

心混合物并弃去上清液。

将神经元重悬于缓冲液中,并将它们转移到微量离心管中。

进行流式细胞术以检测标记神经元上的荧光信号,对应于MRC复合物亚基的表达水平和相对线粒体DNA水平的测量。

样品封闭在 1 毫升封闭缓冲液中,并通过用 PBS 离心洗涤细胞,如图所示。要检测不同的线粒体复合物和亚基,请将细胞与文本手稿中描述的相应一抗孵育30分钟。用PBS洗涤细胞一次后,将细胞与二抗孵育30分钟。

孵育结束时,如图所示,将细胞洗涤并重悬于 PBS 中。将细胞悬液转移到 1.5 毫升微量离心管中,在黑暗中,在冰上保存。接下来,分析流式细胞仪上的细胞并检测信号,并使用 530/30 带通滤波器过滤一个。

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Last updated: 18 July 2026