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神经科学
0 次观看 • 3:14 分钟 • July 8th, 2025
位于小鼠脑干双侧的蓝斑区域含有产生去甲肾上腺素的神经元，并调控大脑中的多个区域。
为了检测这些蓝斑区域，首先准备载有固定且经冷冻保存的小鼠脑干切片的玻片。
用缓冲液冲洗载玻片，以去除固定剂残留。
加入含有去污剂的缓冲液，孵育以通透细胞膜，然后洗涤。
加入特异性针对多巴胺β-羟化酶（dopamine β-hydroxylase）的初级抗体，该酶可将多巴胺转化为去甲肾上腺素，一种神经递质。
孵育以使抗体与多巴胺 β-羟化酶相互作用。
洗涤以去除未结合的抗体。
然后加入绿色荧光染料标记的二抗，并在避光条件下孵育。
二抗与一抗结合，然后洗涤。
向脑切片中加入封片介质，然后盖上盖玻片并干燥。
在荧光显微镜下观察载玻片。
脑切片中代表标记的去甲肾上腺素能神经元的绿色荧光表明了蓝斑区域的存在。
第一天，在24孔板中用PBS清洗脑切片，每次5分钟，共清洗3次。然后加入含去污剂的0.5% PBS，在4摄氏度下透化处理24小时。
次日，用含0.5% PBSD的溶液将切片清洗三次，每次5分钟。然后，在0.5% PBSD中按1:500的比例加入一抗，在4摄氏度下孵育18小时。
第3天，用0.5% PBSD将切片清洗3次，每次10分钟。然后，在0.5% PBSD中按1:1,000的比例加入二抗。用铝箔纸包裹培养板，在4摄氏度下孵育16小时。
孵育后，用含0.5% PBSD的溶液清洗脑片3次，每次5分钟，随后在PBS中清洗5分钟。用不含DAPI的硬封片剂覆盖切片，加盖盖玻片，室温避光干燥30分钟。然后使用共聚焦显微镜，根据适当的荧光波长设置参数，对脑片进行成像。