从小鼠脑组织间液中进行微透析以分离细胞外蛋白质

0 次观看2:29 分钟 • July 8th, 2025

取一只脑内植入引导套管的麻醉小鼠。

导管内的假性探针可防止组织碎片进入。

将一个颈圈套在小鼠的颈部。

将假探针更换为含有特殊半透膜的微透析探针,该半透膜允许高分子量分子通过。

通过入口和出口端口将探针连接至泵,以调节生理缓冲液的流动。

使用项圈将小鼠固定在笼内,使其恢复,然后启动气流。

缓冲液通过入口进入脑组织,并与细胞外间隙中的组织间液(ISF)混合,该液体含有参与细胞间通讯的蛋白质。

组分穿过膜后,通过出口以组分形式被收集。

所收集的含有细胞外蛋白质的ISF已准备好进行分析。

将套管置于已植入导管套管并处于麻醉状态的动物颈部,取下帽状螺母和假探针。通过导管套管缓慢插入微透析探针,并拧紧帽状螺母。

然后,将小鼠放入与自由活动系统相连的笼子中,并用颈圈固定小鼠。至少一小时后,依次停止滚轴泵和注射泵,随后重新启动泵,使注射泵的流速比滚轴泵快20%,并将出口管路的自由端置于冷藏的组分收集器上,以收集脑组织间液(ISF)。当获得适当的实验体积后,取出探针,并按照前述方法处理小鼠的恢复。