基于基质的微胶质细胞-胶质母细胞瘤共培养肿瘤侵袭模型

首先将用不同荧光染料标记的低温胶质母细胞瘤细胞和小胶质细胞悬浮液分别加入低温聚合物基质溶液中。

低温条件可防止基质过早聚合。

接下来，将混合物转移至培养板内的多孔腔室插入物中。

孵育以促进基质聚合，形成包埋细胞的凝胶。

向插入物中加入无血清培养基，向下方孔板中加入含血清的生长培养基，然后进行孵育。

血清中的化学因子促进细胞向富含血清的培养基迁移。

此外，小胶质细胞会分泌与胶质母细胞瘤细胞相互作用的信号分子。

这会促进胶质母细胞瘤细胞向多孔插入膜的下表面迁移，类似于它们从肿瘤向周围组织的迁移过程。

从培养室顶部移除细胞。

现在，用固定剂固定剩余的细胞，并用缓冲液洗涤。细胞的特异性荧光有助于追踪细胞迁移。

将基质混合物在4°C下过夜解冻。接着，在冰上用适当的培养基配制浓度为10 mg/ml的基质溶液。然后，收集已标记的细胞，用于悬浮于基质中，操作步骤如前所述。随后，用移液器将1.5 × 10⁵个GL261细胞（体积为150 µL）以及5 × 10⁴个小胶质细胞（体积为50 µL）加入一个1.5 mL微量离心管中。

将2 × 10⁵个GL261细胞加入到200 µL体积中，置于一个单独的1.5 mL微量离心管中。在微量离心机中以120 × g离心5分钟。然后，将细胞重悬于200 µL预冷的基质中，并置于冰上。

此步骤中，务必将冰盒预先准备好并放置在超净台内。将离心管置于冰箱中的冰上。确保所有物品均处于冷藏状态，以防止成熟凝胶过早发生聚合。

重悬后，将50,000个细胞加入50微升体积中，接种至8微米孔径的Transwell小室上室的中央。随后，在37摄氏度下孵育30分钟，以使凝胶聚合反应发生。30分钟后，在上室中加入200微升无血清培养基，在下室中加入700微升含血清的细胞生长培养基。

孵育48小时后，通过轻柔抽吸去除小室上层的细胞。按之前方法固定小室，成像前用500微升1X PBS替换固定液。