使用神经肽受体激动剂刺激背根神经节感觉神经元

取一个含有转染的大鼠背根神经节感觉神经元的多孔板。

测试孔中的神经元表现出神经肽受体表达降低，而对照孔中的神经元则表现出生理水平的神经肽受体表达。

更换为无血清培养基，以提供受控环境，确保刺激反应的准确性。

向孔中加入神经肽受体激动剂并混匀。孵育培养板。

在对照孔中， 神经肽受体激动剂与靶受体结合，触发细胞内信号级联反应，从而释放神经递质。

然而，在检测孔中，神经肽受体表达降低限制了激动剂的结合，导致与对照组相比神经递质释放减少。

孵育后，收集孔中的培养基并离心。

将上清液转移至离心管中，并使用合适的免疫分析方法测定神经递质水平。在神经受体激动剂刺激后，对照样品的神经递质释放量高于测试样品。

第6天，在铺板后以及siRNA转染72小时后，更换培养基为200微升无血清培养基。30分钟孵育后，加入1微升刺激剂化学物，用移液器轻轻混匀。在所需孵育时间结束后，从培养皿中收集培养基，并在5,000倍重力下离心 g 在4摄氏度下离心5分钟，以去除任何悬浮杂质。收集离心后的上清液，并根据需要使用磷酸盐缓冲液稀释。