0 次观看 • 4:10 分钟 • July 8th, 2025
从含有小鼠脑微血管内皮细胞的膜插件开始，该模型类似于体外血脑屏障。
将此插入物放入含有内置电极的跨内皮电阻（TEER）仪器孔中。
向底部隔室加入新鲜培养基。
将带有电极的盖子置于TEER小室上，然后将仪器放入培养箱，并连接至记录系统。
电极在细胞层上产生电流，用于测量跨内皮电阻。
细胞间完整的连接蛋白会阻碍电流通过，导致更高的TEER值。
断开仪器连接并将其移除。
拆卸上盖，从上室移除部分培养基，并加入预先活化的T细胞。重新组装仪器以进行TEER测量。
活化的T细胞与内皮细胞相互作用，释放炎性因子和细胞溶解酶，破坏连接完整性。
这种破坏会增加电流流动，导致TEER值降低。
为建立跨上皮电阻（TEER）测量，将 TEER 仪器的 24 孔模块置于超净工作台中。取下盖子，用镊子将含有 MBMEC 的插入式培养小室放入仪器中。
接下来，将810微升新鲜培养基用移液器加入模块孔的下室中。加样时需小心，将液体加在插入物与模块孔壁之间。随后，盖上盖子，将仪器放入培养箱中。将仪器连接至计算机，然后打开仪器控制器并启动软件。
在弹出窗口中，选择“新建测量”。勾选“显示 TEER”和“显示 Ccl”选项，然后按“开始”。完成第一次测量后，在“结果”选项卡中选择“检查所有孔”，以查看所有 TEER 和 Ccl 值。然后保存文件。
接下来，选择在Ccl稳定且低于1微法/平方厘米、TEER达到最大值时，将MBMECs与T细胞进行共培养的时间点。仔细检查TEER和Ccl的绝对值，并取消勾选MBMECs未形成足够融合单层的孔，将其排除。
通过右键单击孔并选择“将孔添加到新的平均孔”来对剩余的孔进行分组。在弹出窗口中为其命名，并对所有需要分组的单个孔执行相同操作。然后，检查所有平均孔，确认它们在共培养前具有相同的初始条件。
在“实验”选项卡中，按下“暂停”。断开仪器连接并将其从培养箱中取出。随后，在超净工作台中移除盖子。接着，从插入物的上层小室中移除部分培养基。通过小心地移取150 µL培养基，将T细胞加入MBMEC中。然后，重新连接仪器，并按下“继续测量”。24小时后，在“实验”选项卡中按下“停止”，并保存文件。