小鼠脑基底前脑Meyner核内神经纤维的免疫组织化学染色

取含有富含表达胆碱乙酰转移酶神经纤维的梅内特基底核的固定小鼠脑切片。

对切片进行预处理以灭活内源性过氧化物酶。

加入去垢剂以通透细胞膜，随后加入封闭液以防止抗体非特异性结合。

用可结合胆碱乙酰转移酶的一抗溶液替换原有溶液。

用缓冲液洗涤以去除未结合的抗体。加入生物素标记的二抗进行孵育，二抗可与一抗结合。

去除未结合的抗体，加入亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，使其与二抗结合。

洗涤以去除过量的复合物。

加入一种与过氧化物酶反应的显色底物，形成有色沉淀。

用蒸馏水冲洗，以去除过量沉淀物。

将切片转移至明胶包被的载玻片上。

接下来，使用浓度递增的乙醇进行脱水，然后用二甲苯处理。

将切片装片并在显微镜下观察，以显示染色的神经纤维。

进行组织切片的免疫组织化学标记时，先用含10%正常牛血清和0.1% Triton X-100的Tris缓冲盐水封闭非特异性结合位点，然后在4摄氏度下用目标一抗孵育切片48小时。

孵育结束后，用新鲜的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水洗涤切片，每次三分钟，共洗涤三次。随后在室温下用适当的生物素标记的二抗孵育一小时。

孵育结束后，如所示，用新鲜的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水洗涤切片三次。随后根据生产商的说明书，使用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物和DAB过氧化物酶底物溶液进行染色。

洗涤后，将一个脑组织样本的所有切片贴附于一张明胶包被的载玻片上。让样本自然晾干。为使切片脱水，按顺序依次将样本浸入梯度递增的乙醇溶液中，每个浓度浸泡5分钟，重复两次，随后用二甲苯洗涤两次，每次10分钟以透明化切片。然后，使用适当的封片介质将盖玻片封固于载玻片上。