一个 体外 研究病原体穿越血脑屏障及脑细胞感染的模型

取一个由多孔膜分隔两个区室的体外血脑屏障（BBB）模型。

上部或管腔 compartment 含有微血管内皮细胞。这些细胞表达紧密连接，模拟血脑屏障内皮，限制细胞和分子的通过。

下部或脉管外室含有神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞，代表脑实质。

引入嗜神经病毒至管腔室以模拟血源性感染，并进行孵育。

病毒被内皮细胞通过内吞作用摄入，在囊泡内进行细胞内转运，并在基底外侧释放。

孵育结束后，移除上室。从血管外侧采集培养基样本，以评估病毒量，确认病毒成功穿过内皮层。

加入新鲜培养基，再次孵育。

病毒通过内吞作用进入神经细胞，进行复制，并释放子代病毒。

定量检测细胞外病毒载量的增加，以确认病毒的神经侵袭和复制。

在建立BBB微型脑装置后，如演示所示，将3,500个蚀斑形成单位的黄热病毒法国嗜神经病毒株，用50微升含2% FBS的内皮细胞培养基小心地加入管腔室顶部。对照组BBB微型脑装置则加入50微升不含病毒的含2% FBS的内皮细胞培养基。随后，将接种病毒的BBB微型脑装置置于培养箱中培养24小时。

第二天，取出插入物以测定伴生孔中内皮细胞的通透性（方法如前所述），并从每个孔中保留1毫升样品，用于测定血管外腔室中的病毒滴度。

插入时应轻柔操作，以避免管腔部分的液体泄漏至管腔外部分。