利用化学交联实验在小鼠脑组织中交联神经元表面蛋白

从一只置于冰冻缓冲液中的分离小鼠脑组织开始。

将脑组织转移至脑切片矩阵中，腹面朝上。

插入剃须刀片，依次切割脑部前段。

将刀片连同脑片一同抬起，使后部组织留在原位。分开剃须刀片，将其放置于预冷的表面上，确保脑片朝上。

选择目标切片并提取感兴趣区域。

将组织切碎并剁细。

将切碎的组织转移至含有添加了化学试剂BS3的脑脊液的离心管中。

倒置并混匀试管，使组织破碎成更小的片段，然后在旋转条件下孵育。

BS3 是一种细胞膜非渗透性化学物质，可交联神经元表面蛋白（如 GABA 受体），而细胞内 GABA 受体则保持不变。

加入甘氨酸以终止交联反应。

样本已准备好用于评估表面 GABA 受体水平。

首先，迅速将安乐死后的 C57 black 6J 小鼠脑组织从颅骨中取出。将其浸入含有冰冻 PBS 的培养皿中 10 至 15 秒。将冷却后的脑组织腹面朝上置于冰上的脑切片模具中。为进行冠状面切割，将第一把剃刀刀片插入嗅球与嗅束之间的边界处。随后使用三到四把额外的剃刀刀片，以 1 毫米的间隔连续对脑组织前部进行冠状面切片。

将插入的刀片握在一起，提起冠状切片，使脑组织从脑矩阵中脱离，保留后部组织。用镊子将刀片彼此分开，将切片朝上放置在平坦的预冷表面上。

采集前额叶皮层时，选择位于嗅束首次出现切片之后的第二和第三脑片。使用组织打孔器或镊子切除目标区域。将组织置于预冷的刀片上，并均匀地切成两份。用镊子的细尖在刀片上以多次垂直动作将每份组织充分剪碎。向预冷的、已标记并含有人工脑脊液的离心管中加入30微升BS3溶液。随后，立即将剪碎的组织转移至目标离心管中。

进行交联反应时，将含有组织和溶液的离心管上下颠倒，以将组织块破碎成小片段。将样品置于4摄氏度的旋转摇床上孵育30分钟至2小时，并记录每根离心管中BS3孵育的开始时间。随后，加入78微升1摩尔的甘氨酸以终止反应。继续在4摄氏度下恒定旋转孵育10分钟，并记录淬灭反应的开始和结束时间。