处理小鼠大脑以进行下游分析

0 次观看4:44 分钟 • July 8th, 2025

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取一个新鲜收获的小鼠大脑,将其在预冷的异戊烷中快速冷冻,以快速保存组织。

接下来,将大脑皮层面朝上转移到冷冻的大脑基质中,以在切片过程中保持寒冷的环境。

让大脑平衡到基质温度。沿矢状窦和横窦将其对齐在基质中,以确保对称的截面。

冷冻的刀片插入大脑,确保正确对齐。

然后,将它们均匀地向下压以获得均匀的大脑切片。

取下带有切片的刀片,将它们放在冷冻玻璃板上,喙朝上。

按照正确的解剖顺序组织从喙部到尾部方向的切片。现在,将它们分开。

使用合适的大脑参考,从切片中定位并切除感兴趣的区域。

切除的组织转移到预冷的小瓶中进行下游分析。

安乐死的成年CD-1野生型小鼠中取出大脑后,将组织在液氮或用干冰预冷的异戊烷中快速冷冻60秒,并将其储存在-80摄氏度。

解剖组织前 24 小时,将干净的大脑基质放在一堆解冻的冷冻包上,并将基质的侧面夹在两个冷冻包之间,确保在剃须刀槽底部和顶部之间留出大约半厘米的距离包装。

通过在

距顶部约 5 厘米处装满隔热盒冰块,设置一个用于解剖的冷冻玻璃板。然后,在上面铺上一层2.5厘米厚的干冰,并盖上黑色塑料布。在塑料上放一块玻璃板,在板的边缘周围放上干冰。

冰箱中取出冷冻的脑基质,将脑皮层面朝上插入基质中。让组织与盒子中的温度平衡 10 分钟,在此期间保持盖子打开。用冷镊子调整大脑在基质中的位置,使矢状窦和横窦与块的垂直沟对齐。

大脑就位后,将冷却的剃须刀片放在其中心附近,并将其压入组织约 1 毫米。接下来,在大脑的两端放置一个冷却刀片,然后一直向下压入基质。然后,开始在喙端添加冷冻刀片,一次将它们一个地放入槽中,然后轻轻地将它们压入组织 1 毫米。继续以 1 毫米的间隔添加刀片,向尾端工作。

所有刀片都就位后,用手指、手掌或钝器向下按压顶部,然后慢慢地左右摇晃它们,使它们穿过组织。一旦刀片到达插槽的底部,抓住刀片组的每一侧,并通过来回摇晃将它们从矩阵中释放出来。

释放刀片组后,将它们的喙面朝上放在玻璃板上,并在堆叠旁边或顶部放置干冰,以进一步冷冻样品,以便于分离。然后,将锋利边缘朝下的堆叠放置,并通过在拇指和手指之间移动堆叠来分离刀片。

玻璃板上的部分从喙部到尾部对齐,并通过在手指之间弯曲组织或用第二个冷却刀片将它们分开来将组织与刀片分开。有时,组织可能会粘在刀片的两侧,必须注意保持头侧到尾部的方向。

在开始解剖之前,打开 Allen Mouse Brain Atlas 或其他参考资料,找到识别感兴趣区域所需的地标。使用冷冻的镊子或刀片翻转切片,并确保感兴趣的区域在整个切片中保持一致。

用干净的手术刀或冲头切开该部分,将金属轻轻但牢固地推入组织中,来回摇晃以进行切割。收获感兴趣区域后,将其放入贴有标签的预冷 1.5 毫升管中,并储存在 -80 摄氏度。

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最后更新:1 八月 2026