靶向多巴胺神经元的小鼠脑组织切片免疫组化

0 次观看2:42 分钟 • April 29th, 2025

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取聚合物涂层载玻片,其中包含表达酪氨酸羟化酶(多巴胺合成关键酶)的多巴胺神经元的小鼠脑组织切片。
用疏水笔勾勒切片的轮廓,以确保染色均匀。
将组织固定在丙酮-甲醇溶液中以保持组织形态。
用含有洗涤剂的缓冲液冲洗以透化细胞膜><。与多巴胺神经元中靶向酪氨酸羟化酶的一抗孵育,然后洗涤以去除未结合的抗体。
加入荧光染料标记的二抗、核染料和RNase抑制剂。
在孵育过程中,二抗与一抗结合,核染料标记细胞核,RNase抑制剂使RNase失活。
用缓冲液冲洗。然后,以增加浓度的乙醇脱水组织切片。
在二甲苯中孵育以清除组织。
处理过的组织切片现在已准备好进行激光捕获显微切割,从而可以精确地可视化和解剖目标多巴胺神经元。

要进行免疫组织化学,请使用疏水笔勾勒出组织的轮廓并让它们干燥。然后,在1至1丙酮甲醇溶液中,将组织固定在负20摄氏度下10分钟。从冰箱中取出组织后,用 PBS 中的 100 至 200 微升酪氨酸羟化酶抗体和 1% Triton 覆盖切片 10 分钟。

然后,使用含有 1% triton 的 PBS 冲洗载玻片,然后用 100 至 200 微升山羊抗兔 IgG 覆盖切片,用 Alexa Fluor 488 标记。孵育五分钟,然后使用PBS冲洗载玻片两次。接下来,将样品在一系列分级的无 RNase 乙醇中脱水 30 秒,如本视频前面所示。在二甲苯中孵育一分钟,第二次洗涤五分钟。在用于 LCM 之前立即取下载玻片并让它们风干。

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最后更新:1 八月 2026