肿瘤细胞侵袭的三维球体模型构建

取一培养皿人脑肿瘤细胞。

使用解离酶处理，以破坏细胞连接，分离聚集的细胞。

用缓冲液洗涤以终止酶活性，然后加入培养基以维持细胞活力。

介绍甲基纤维素，一种悬浮剂。

将悬液转移至圆底微孔板中并孵育。

黏稠的甲基纤维素可使细胞保持悬浮状态，促进细胞间相互作用，从而聚集形成球状体。

将类球体与模拟生理细胞外环境的胶原基质混合。

将悬液转移至微孔板中，孵育，使基质形成凝胶以包埋类球体。

将培养基加在凝胶上方。

在类球体外围，肿瘤细胞失去细胞间黏附，并呈现出侵袭性表型。

这些细胞分泌蛋白酶以降解基质，伸出突起锚定自身，并向前移动，侵入基质。

用于分析肿瘤侵袭的类球体模型已准备就绪。

为了生成大小均一的肿瘤类球体，首先用5毫升PBS洗涤目标肿瘤细胞培养物，并加入0.5至1毫升解离酶处理细胞。在37摄氏度作用5分钟后，加入4至4.5毫升PBS终止反应，将脱落的细胞转移至含有10毫升完全培养基的15毫升锥形管中。

计数后，将细胞重悬于8毫升完全培养基中，使细胞密度为1×10⁶个细胞/8毫升，并加入2毫升浓度为2%的甲基纤维素，混匀后转移至无菌体系容器中。随后，向96孔圆底培养板的每孔中加入100 µL细胞悬液，将培养板置于37°C、5% CO₂的培养箱中培养3至4天。

进行侵袭实验时，当肿瘤细胞形成大小均一的球状体后，将每个细胞结构转移至含有500微升培养基的离心管中，用200微升磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤球状体一次。第二次洗涤后，小心地将球状体转移至100微升新配制的胶原基质中，并将每份球状体悬液加入平底96孔板各孔的中央位置。

在37摄氏度孵育30分钟后，向每个孔中的凝胶上层加入100微升完全生长培养基。

务必把所有类球体置于每个孔的中央，以获得最佳的肿瘤细胞侵袭成像效果。