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神经科学
0 次观看 • 3:01 分钟 • April 28th, 2025
从一个平底多孔板开始，该多孔板预先包被有基底膜基质，其中含有细胞外聚合物和黏附蛋白，可模拟肿瘤微环境中的基质成分。
加入含有源自儿童脑肿瘤的胶质瘤细胞神经球的培养基，确保神经球位于孔板中央位置。
基质促进神经球附着于孔壁。
加入背景抑制试剂以减少非特异性荧光。
接下来，加入绿色荧光素标记的抗 CD44 抗体。
将培养板转移至置于培养箱内的活细胞成像系统中，以维持细胞的生理条件。
随着时间推移，胶质瘤细胞会表达细胞黏附蛋白 CD44，该蛋白可与黏附蛋白相互作用。
这会激活细胞信号通路，并促进细胞从神经球中迁移出来。
荧光染料偶联的抗CD44抗体与胶质瘤细胞上表达的CD44结合，使其产生荧光。
观察到绿色荧光细胞从神经球向外移动，可证实胶质瘤细胞的迁移。
BMM 包被完成后，剪切一个 P200 吸头。从每个选定的孔中吸取 50 微升细胞培养基和神经球（NS），转移至已包被的平底孔中。通过肉眼观察每个孔中神经球的存在情况及其位置。轻柔地向每个孔中加入 50 微升稀释后的 BSR 和 ALR 抗体，等待 2 至 3 分钟使试剂充分混合。使用倒置显微镜观察，确保大多数重复孔中的神经球位于孔中央。确认无气泡后，轻柔地将培养板转移至活细胞分析仪中，操作方法如前所述。
在活细胞分析仪软件中，选择“计划采集”选项。然后点击加号标签，选择“按计划扫描”，以按照文稿中所述的时间间隔对培养板进行扫描。在软件窗口中创建或恢复容器，然后点击“新建”选项。选择“稀释克隆”扫描类型、4倍物镜，并为迁移实验选择明场和绿色荧光通道。选择培养板类型，并在板位图上通过高亮标记选定需要扫描的孔。随后设置扫描频率。点击“添加到计划”并开始扫描。