使用免疫荧光法对小肠神经内分泌肿瘤类球体进行表征

取小肠神经内分泌肿瘤类球体置于试管中。

加入固定剂溶液以保存细胞。

进行洗涤、离心，并用缓冲液替换固定剂。

离心并弃去上清液，以去除任何残留的固定剂。

加入含有去污剂和封闭剂的缓冲液，以通透细胞膜并防止非特异性抗体结合。

用缓冲液洗涤以去除多余的去污剂和封闭剂。

与一抗孵育，一抗可结合神经内分泌细胞中特异的目标蛋白。

用缓冲液洗涤以去除未结合的抗体。

加入与一抗结合的荧光标记二抗。

用缓冲液冲洗以去除多余的抗体。

加入含有染色剂的封片剂以染色细胞核。

将球状体转移至载玻片上，并用盖玻片封片。

使用荧光显微镜观察类球体中表达特定蛋白的神经内分泌细胞。

加入500微升多聚甲醛固定类器官，孵育15分钟。孵育结束后，用1毫升PBS洗涤培养物两次。加入含3% BSA和0.1% Triton X-100的500微升PBS以对培养物进行透化处理。将离心管孵育5分钟后，用含3% BSA的1毫升PBS洗涤类器官三次。

接下来，将培养物与一抗在室温下孵育一小时，然后用 PBS 和 BSA 重复洗涤。再与二抗孵育，并重复洗涤步骤，注意吸除并弃去所有上清液。

对类球体进行成像时，加入5 µL含有DAPI的封片剂，使用P20移液器将5 µL类球体转移至载玻片上。用盖玻片封片，并使用荧光显微镜配合10、20和40倍物镜进行成像。