急性小鼠脑切片中氧气消耗速率的测定

将健康小鼠和神经退行性疾病小鼠的脑片穿孔样本置于样品承载筛网上。

翻转筛网并将其放入组织培养板中。

取一个预校准的传感器盒，其中包含传感器探针。将化合物——丙酮酸、寡霉素、FCCP 和抗霉素 A——加入注射端口。

将 cartridge 置于组织板上，在细胞外通量分析仪中启动运行。

探针测量脑片的耗氧率（OCR）。

第一次注射后，丙酮酸进入线粒体，生成电子载体。

这些载体将电子传递给电子传递链（ETC）的复合物I和复合物II，启动电子转移反应，从而增加氧气消耗和耗氧率（OCR）。

寡霉素抑制复合体V，阻断ATP合成并降低耗氧率。

FCCP 是一种质子载体，可破坏质子梯度，从而增加氧气消耗和氧消耗率（OCR）。

抗霉素A结合复合体III并阻断电子传递链，从而最小化氧消耗率（OCR）。

比较OCR谱图。

神经退行性切片中OCR降低表明线粒体功能受损。

吸取一块打孔的脑组织，小心地将组织放置在捕获筛网的网状面。该捕获筛网为一侧附有网状结构的圆形塑料片。用纸巾轻轻擦干捕获筛网，去除水分，使组织变黏并牢固附着于网孔中央。

接下来，用镊子夹住捕获屏幕，将切片面朝下放入孵育胰岛板的其中一个孔中。然后将胰岛板置于37°C的培养箱中孵育至少30分钟，使温度和pH平衡，再进行检测。将所需的化合物和不含BSA的改良人工脑脊液分别稀释至A到D各孔工作浓度的最终储备浓度。

将稀释后的化合物轻轻预装入传感器 cartridge 相应的进样口，移液枪头以45度角插入进样口一半深度，并使枪头紧贴进样口壁，完全插入可能导致化合物从进样口泄漏。随后，小心地从进样口中抽出枪头，避免产生气泡，切勿敲击 cartridge 的任何部位，以防扰动气泡。然后，目视检查进样口是否加样均匀，确保所有液体均位于进样口内，且 cartridge 顶部无残留液滴。

将传感器盒放置到功能板上后，小心操作，仅握住功能板并尽量减少移动，将其放入培养箱中孵育30分钟，使其升温至37摄氏度。首先，在软件中加载检测模板，然后按下绿色的“开始”按钮。接着，将装有传感器盒的功能板放入仪器托盘中，确保板放置正确且平整，并将装有药物的传感器盒载入分析仪中进行校准。

随后，按照屏幕上的指示进行传感器的校准与平衡。平衡步骤完成后，取下校准板，换上含有网格和组织切片的胰岛板。然后根据文中所述的检测方案，测量板中每个孔的氧消耗率。接着分析氧消耗率、测量数据以及偶联效率数据。