基于阻抗的脑癌细胞侵袭性测量

取一个包含上室和下室的细胞侵袭与迁移实验板。

上室包含一片微孔膜，其底部设有用于测量阻抗的金质微电极阵列。用细胞外基质（ECM）溶液包被该膜。

向较低的腔室中加入高血清培养基。

然后，向培养板上室加入低血清培养基，并孵育以适应培养条件。

在微电极两端施加微弱的电势以测量基线阻抗。

将脑癌细胞接种于上室，并使其在细胞外基质（ECM）上沉降。

高血清培养基起到化学趋化剂的作用，引导细胞向其移动。

细胞分泌能够降解细胞外基质（ECM）的蛋白酶，使其能够穿过膜孔向趋化因子移动。

当细胞迁移时，会黏附在微电极上，导致细胞阻抗增加。

随着时间推移，更多的细胞迁移并附着到微电极上，进一步增加细胞阻抗，这反映了这些细胞的侵袭潜能。

在进行实时细胞分析前五到六小时，将实时细胞分析系统放入细胞培养孵育箱中。为建立侵袭实验，使用反向移液法将50微升添加了0.1微克/毫升细胞外基质凝胶的DMEM培养基加入细胞侵袭板上室的每个孔中。

铺板后立即从每个孔中移除 30 微升细胞外基质溶液，并将培养板放入细胞培养箱中孵育 4 小时。为在测量前 6 小时建立阻抗检测程序，用低血清培养基替换所有电穿孔细胞培养物中的培养基。在相关阻抗检测软件的“布局”选项卡中，为每种生物学条件选择四个重复孔。

在“计划”选项卡下，设置一个一次性基线测量扫描步骤，间隔时间为一分钟；再设置第二个步骤，用于在实际实验中分别对各个独立支架中的细胞阻抗进行测量。在开始细胞阻抗测量前一小时，向细胞侵袭与迁移板下室的各孔中加入160 µL培养基，培养基中需添加10%胎牛血清作为趋化因子。

向培养板上室的孔中加入 50 µL 低血清培养基，并将培养板放入系统的支架中。

在软件中点击“消息”标签，以确认控制单元是否已识别所有孔。若消息显示正常，则表明支架中的培养板已准备好进行实验。随后，将完全组装好的培养板放入实时细胞分析系统支架内的细胞培养孵育箱中，平衡一小时，使培养板适应细胞培养条件。

在平板平衡的同时，按照所示方法收获胶质母细胞瘤细胞，并将每种条件下的细胞重新悬浮于800 µL低血清培养基中，细胞浓度为每800 µL含8 × 10⁵个细胞。

为测量迁移前的基线读数，在适应期结束时，点击支架上的“开始”按钮。获取基线测量数据后，将迁移和侵袭板从各自的支架转移至生物安全柜中。

根据摇床控制单元的程序设置，在细胞侵袭与迁移板的相应孔中，将每种生物学条件下细胞以反向移液方式加入上室孔，每孔100微升，每个条件设四个重复孔。接种后，将板置于生物安全柜中，室温静置30分钟，使细胞均匀沉降到板底，随后将板转移至对应的摇床支架中。

点击摇篮启动按钮以开始测量细胞阻抗。若要在实验过程中或实验结束后以随时间变化的方式将细胞阻抗的改变以细胞指数形式可视化，请打开数据分析选项卡。若要单独或以均值和/或标准差的形式查看各相应条件下的数据，请勾选均值和标准差的选项框。

要将细胞索引数据