基于阻抗的脑癌细胞侵袭测量

取一个包含上下腔室的细胞侵袭和迁移板。

上腔室包含一个微孔膜，其底部有一个阻抗测量的金微电极阵列。用细胞外基质或ECM溶液包覆膜。

用高血清培养基填充下腔室。

然后，将低血清培养基加入上室并孵育以适应培养条件。

在微电极上施加微弱电位以测量基线阻抗。

在上腔室中播种脑癌细胞，让它们沉降在ECM上。

高血清培养基充当化学引诱剂，引导细胞向它移动。

细胞分泌降解ECM的蛋白酶，使它们能够通过膜孔向趋化剂移动。

当细胞迁移时，它们会粘附在微电极上，从而增加细胞阻抗。

随着时间的推移，更多的细胞迁移并附着在微电极上，进一步增加细胞阻抗，这反映了这些细胞的侵袭潜力。

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铺板后，立即从每个孔中取出 30 微升细胞外基质溶液，并将板放入细胞培养箱中四个小时。要在测量前六小时设置阻抗测量程序，请用低血清培养基替换所有电穿孔细胞培养物中的培养基。在相关阻抗测量软件的布局选项卡下，为每个生物条件选择四重孔。

在"计划"选项卡下，设置间隔为一分钟的一次性基线测量扫描步骤，并设置第二个步骤来测量实际实验中各个支架中的细胞阻抗。在细胞阻抗测量开始前一小时，加入160微升培养基，补充10%胎牛血清作为趋化剂，进入细胞侵袭和迁移板下室的孔中。

用50微升低血清培养基填充上室中的孔，并将腔室放入系统的支架中。

单击软件中的消息选项卡，确定控制单元是否识别所有孔。如果消息按预期显示，则支架中的板已准备好进行实验。然后，将完全填充的板放入实时细胞分析系统支架中的细胞培养箱中一小时，使板适应细胞培养条件。

当板平衡时，如图所示收获胶质母细胞瘤细胞，并以每800微升800微升的8倍10到第五个细胞重悬每种条件下的细胞低血清介质浓度。

要测量基线迁移前读数，请在适应结束时单击底座"开始"按钮。获得基线测量值后，将迁移板和侵袭板从各自的摇篮转移到生物安全柜中。

将 100 微升细胞反向移液到细胞侵袭和迁移板的适当孔中的相应孔中的四倍上腔孔中，如控制单元中编程的那样。摇篮。接种后，将板在室温下在生物安全柜中保存 30 分钟，让细胞均匀地沉降在板底部，然后再将板转移到各自的支架上。

单击支架开始按钮开始测量细胞阻抗。要在实验期间或实验完成后以时间依赖性方式将细胞阻抗的变化可视化为细胞指数，请打开"数据分析"选项卡。要单独或作为平均值和/或标准差可视化每个相应条件的数据，请单击平均值和标准差的选项框。

要将单元格索引数据导出到电子表格文件，请将光标放在"数据分析"窗口的中间，然后右键单击，在出现的对话框中选择"将数据复制到列表中"。格式选项并将数据粘贴到打开的电子表格中。要释放实验，请单击每个底座中的释放按钮。