0 次观看 • 3:18 分钟 • April 28th, 2025
从人眼开始,去除鞘膜以暴露视神经。
将眼球沿中线切开,然后从后段取出玻璃体。
修剪巩膜(即外层),并展开视网膜,其中视网膜神经节细胞通过筛板(一种网状结构)与视神经相连。
将此片段置于经巩膜自主系统的下腔穹顶上方,使视神经朝上,然后进行密封。
连接管路并灌注灌流培养基。
液体的流动在眼杯内部产生压力,类似于眼内压。
接下来,将上层腔室放置在视神经上方并进行密封。
将导管连接至神经周围以循环培养基,模拟颅内压。
这两个腔室之间的压力差在筛板上形成跨层压力,从而可在该压力条件下研究视网膜神经节细胞向视神经的信号传递。
制备人全眼球样本时,需去除视神经鞘,并从眼后段清除玻璃体。为确保样本能良好贴合眼压(IOP)测量室的圆形穹顶,可根据需要修剪眼后段多余的巩膜,并使用镊子将视网膜均匀铺展于眼后段内表面。随后将眼后段置于TAS系统的IOP测量室圆形穹顶上,使视神经朝上,再使用环氧树脂O型圈和4枚螺钉将眼后段密封固定。
设置眼内压(IOP)灌注 chamber 时,将管路插入 chamber 的进液口和出液口,将眼内压进液端注射器插入进液口。将空的眼内压出液端注射器装置插入出液口,采用推-拉法缓慢将灌注液推入进液口,以填充后部眼球杯,同时通过出液端注射器缓慢抽出灌注液,以去除管路中的所有气泡。当进液和出液管路均无气泡后,停止灌注,并将旋塞阀关闭并锁定在关闭位置。
将注射器从眼内压导入滤器组件中取出,并用额外的 30 毫升培养基重新填充注射器。然后将注射器装置重新插入滤器组件中。设置颅内压腔室时,将腔室置于后段组织背面,注意使视神经位于上腔室内,并用 4 个螺钉密封上腔室。
然后将管路插入ICP室的进样口和出样口——将ICP输入端注射器插入进样口,将空的ICP流出端注射器插入出样口,以培养基冲洗系统,操作方法如前所示。
本文演示了用于研究跨筛板压力梯度对视网膜神经节细胞信号传导影响的人类供体眼球组织的制备方法。通过使用跨筛板自主系统(TAS),该方案模拟眼内压和颅内压,以探究筛板两侧的压力差如何影响视网膜向视神经传递神经信号的过程。
该方法通过模拟生理相关的跨层压力条件,实现对视网膜神经节细胞靶点的机制性风险评估。通过提供一种与疾病相关、可在受控压力梯度下评估功能反应的系统,支持青光眼研究中的靶点验证。该方法通过在视觉通路信号研究中将压力作为独立变量进行分离,提高了临床前模型的预测可信度。
该方法通过在神经科学和眼科项目中,于靶点识别之后、先导化合物优化之前开展压力调控的功能性检测,从而融入到发现研究的连续进程中。
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最后更新:22 八月 2026