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神经科学
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从人眼开始,去除鞘膜以暴露视神经。
将眼球沿中线切开,然后从后段取出玻璃体。
修剪巩膜(即外层),并展开视网膜,其中视网膜神经节细胞通过筛板(一种网状结构)与视神经相连。
将此片段置于经巩膜自主系统的下腔穹顶上方,使视神经朝上,然后进行密封。
连接管路并灌注灌流培养基。
液体的流动在眼杯内部产生压力,类似于眼内压。
接下来,将上层腔室放置在视神经上方并进行密封。
将导管连接至神经周围以循环培养基,模拟颅内压。
这两个腔室之间的压力差在筛板上形成跨层压力,从而可在该压力条件下研究视网膜神经节细胞向视神经的信号传递。
制备人全眼球样本时,需去除视神经鞘,并从眼后段清除玻璃体。为确保样本能良好贴合眼压(IOP)测量室的圆形穹顶,可根据需要修剪眼后段多余的巩膜,并使用镊子将视网膜均匀铺展于眼后段内表面。随后将眼后段置于TAS系统的IOP测量室圆形穹顶上,使视神经朝上,再使用环氧树脂O型圈和4枚螺钉将眼后段密封固定。
设置眼内压(IOP)灌注 chamber 时,将管路插入 chamber 的进液口和出液口,将眼内压进液端注射器插入进液口。将空的眼内压出液端注射器装置插入出液口,采用推-拉法缓慢将灌注液推入进液口,以填充后部眼球杯,同时通过出液端注射器缓慢抽出灌注液,以去除管路中的所有气泡。当进液和出液管路均无气泡后,停止灌注,并将旋塞阀关闭并锁定在关闭位置。
将注射器从眼内压导入滤器组件中取出,并用额外的 30 毫升培养基重新填充注射器。然后将注射器装置重新插入滤器组件中。设置颅内压腔室时,将腔室置于后段组织背面,注意使视神经位于上腔室内,并用 4 个螺钉密封上腔室。
然后将管路插入ICP室的进样口和出样口——将ICP输入端注射器插入进样口,将空的ICP流出端注射器插入出样口,以培养基冲洗系统,操作方法如前所示。