0 次观看 • 3:06 分钟 • April 28th, 2025
取一只大鼠眼睛中分离出的经化学固定的视网膜。
眼睛表现出热损伤导致的角膜缘血管丛损害,角膜缘血管丛是围绕角膜的一组血管网络。
这种损伤会阻碍房水引流,导致眼内压(IOP)升高,并引起视网膜神经节细胞(RGC)变性。
用通透化溶液处理视网膜,以通透细胞膜和核膜。
加入封闭液以防止非特异性抗体结合。
移除封闭液。
加入靶向主要在视网膜神经节细胞(RGCs)中表达的转录因子的一抗。
洗涤以去除未结合的抗体。
加入与一抗结合的荧光素标记的二抗。
洗涤以去除未结合的抗体。
使用DNA结合染料对细胞核进行复染。
用适当的封片剂将视网膜清洗后封固在玻璃载片上。
在落射荧光显微镜下观察视网膜。
与对照组相比,受损眼睛中细胞密度降低,证实了因眼内压升高导致的视网膜神经节细胞变性。
分离视网膜后,将其转移至含有1毫升PBS的24孔培养板中,保持内层视网膜朝上。用PBS稀释的0.5%非离子型表面活性剂洗涤组织,以实现通透化处理。然后,在室温下轻轻振荡孵育组织1小时,使用封闭液进行封闭。在孵育期间,配制BRM 3A一抗溶液,并于4摄氏度保存。
组织包埋后,将视网膜置于 200 µL 一抗溶液中,在 4 °C 条件下轻轻振荡孵育 72 小时。随后用 PBS 洗涤组织。再将组织置于 200 µL 二抗溶液中,室温孵育 2 小时,然后加入核复染溶液孵育 10 分钟,以实现荧光核染色。
用 PBS 洗涤三次后,使用两把小刷子将视网膜转移至玻璃载玻片上,保持玻璃体面朝上。将视网膜的背侧象限朝上放置于载玻片上。最后,在玻璃盖玻片上加入 200 µL 抗荧光淬灭封片剂,然后将其覆盖在平铺的视网膜样本上,用于显微镜分析。在共聚焦落射荧光显微镜下,使用 40 倍物镜观察平铺样本,以估算视网膜神经节细胞数量。
本研究探讨了在大鼠模型中因眼内压(IOP)升高导致的视网膜神经节细胞(RGC)变性。该方法包括使用免疫组织化学技术对RGC进行可视化,并评估受损视网膜中的细胞密度。
在诱导性眼压升高后对视网膜神经节细胞(RGC)丢失进行定量评估,为研究与青光眼相关的神经退行性机制提供了一个可靠的临床前模型。该工作流程可实现对细胞存活率和退变的高可信度测量,有助于在眼科药物发现中进行早期靶点验证和机制层面的风险评估。对RGC密度的可靠量化可为神经保护与眼病研究交叉领域的项目决策提供依据。
该定量方法可整合到神经退行性眼病从发现到临床前研究的连续过程中,支持靶点验证和先导化合物识别两个阶段。
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
相关视频
0 观看次数
最后更新:22 八月 2026